1、目的：盆腔器官脫垂(POP)是婦科常見病,多見于中老年女性,發(fā)病率較高。子宮脫垂又常常伴隨著尿失禁(UI),隨著盆腔內(nèi)器官膨出部分的增多尿失禁的發(fā)生率上升。這兩種疾病嚴(yán)重影響女性的生活質(zhì)量,它們的發(fā)病機(jī)制尚不完全清除。從流行病學(xué)上看,衰老是盆腔器官脫垂的最大風(fēng)險(xiǎn)因素之一,該病多發(fā)于絕經(jīng)后。從解剖學(xué)上看,盆腔內(nèi)韌帶包圍著盆腔內(nèi)器官并把它們松散地連接到起支持作用的肌肉和骨骼上,它是一種結(jié)締組織網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),若其無法正常合成或修復(fù)異常,都會(huì)增加?jì)D

2、女患盆腔器官脫垂的風(fēng)險(xiǎn)。彈性纖維是結(jié)締組織重要的組成成分,其發(fā)生過程離不開Lox家族,原彈性蛋白活化為彈性蛋白需要Lox家族催化。Loxl1基因敲除小鼠彈性纖維的發(fā)生障礙會(huì)引起子宮脫垂,排尿功能障礙,類似女性的尿失禁癥狀。Loxl1在幼年小鼠的生殖道中高表達(dá),隨著年齡的增長(zhǎng)表達(dá)量逐漸下降;子宮脫垂多發(fā)于絕經(jīng)后,因此我們推測(cè)出這樣的關(guān)系:生殖衰老—Loxl1表達(dá)下降或消失—彈性纖維形成缺陷—盆腔器官脫垂和尿失禁。Lox家族總共5個(gè)成員,目

3、前對(duì)Lox和Loxl1的研究較多,但是其他成員在子宮中也有表達(dá),它們是否與子宮脫垂相關(guān)仍需要相關(guān)的實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)和完善。本實(shí)驗(yàn)利用藥物誘導(dǎo)小鼠卵巢衰老,并以其為衰老模型小鼠來探討三個(gè)問題:(1)小鼠子宮、陰道和膀胱中Lox家族及彈性蛋白在卵巢衰老過程中的變化;(2)Lox家族及彈性蛋白上游受何種因素的調(diào)控;(3)通過調(diào)控Lox家族及彈性蛋白的表達(dá)是否可以恢復(fù)表型的改變。期望可以為盆腔器官脫垂的預(yù)防和治療提供新思路。
　　 方法：<

4、br>　　 (1)給2月齡的小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺120mg/kg,皮下注射白消安12 mg/kg,飼養(yǎng)一個(gè)月后,檢測(cè)小鼠血清雌二醇水平,作為卵巢衰老的一個(gè)指標(biāo)。
　　 (2)提取子宮、陰道和膀胱組織里的總RNA,去DNA和蛋白后反轉(zhuǎn)錄出cDNA,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)對(duì)Lox家族和Elastin進(jìn)行相對(duì)定量。
　　 (3)給卵巢衰老小鼠注射雌二醇,注射量為50 ug/kg,注射3天通過實(shí)時(shí)

5、熒光定量PCR(Real-time PCR)對(duì)Lox家族和Elastin進(jìn)行相對(duì)定量。
　　 (4)數(shù)據(jù)用平均數(shù)±SD表示,結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn),P＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 (1)衰老小鼠血清的雌二醇水平與對(duì)照組2月齡小鼠相比下降43.9％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (2)卵巢衰老小鼠與對(duì)照組2月齡小鼠相比,子宮壁變薄,韌性變差,剝離時(shí)極易斷裂:陰道壁變薄。
　

6、　 (3)與對(duì)照組2月齡小鼠相比,Lox、Loxl1和Loxl2在卵巢衰老小鼠的子宮、陰道、膀胱中的表達(dá)量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Loxl3和Elastin在卵巢衰老小鼠的子宮和陰道中的表達(dá)量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Loxl4在卵巢衰老小鼠的膀胱中表達(dá)量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (4)與卵巢衰老小鼠相比,Lox在給予雌二醇干預(yù)的卵巢衰老小鼠的陰道中以及Loxl1和Loxl2