1、本論文應(yīng)用RAPD、ISSR、SRAP三種標(biāo)記技術(shù)分析了23個香菇菌株的遺傳多樣性。應(yīng)用rDNA-ITS序列分析技術(shù)評價了16個靈芝菌株遺傳多樣性。應(yīng)用SRAP標(biāo)記技術(shù)對以赤芝05和赤芝06為親本的原生質(zhì)體融合子進行了鑒定，主要結(jié)果如下：
　　 1．以23個香菇菌株菌絲體DNA為材料，采用16個RAPD引物，5個ISSR引物及23個SRAP引物組合及PCR技術(shù)，分別擴增出138、77、144個DNA條帶，其中多態(tài)性條帶分別為81

2、、56、81，多態(tài)性比率分別為58.8％、73.5％、56.3％，表明供試香菇菌株間存在一定的遺傳差異，具有一定的遺傳多樣性。
　　 基于RAPD標(biāo)記數(shù)據(jù)的類平均聚類分析（UPGMA）表明：23個香菇菌株兩兩間的相似系數(shù)范圍是0.57～1之間。23（香九）與其他菌株的相似系數(shù)最小，最早于其他菌株分開；其它22個菌株在相似系數(shù)0.80以上分為二組，第1組共有17個菌株，包括為1（申香2號）、2（申香4號）、3（申香6號）、4（申香

3、9號）、5（申香7號）、6（申香8號）、7（申香10號）、8（申香12號）、9（蘇香）、10（武香1號）、11（L26)）、12（L03）、13（L66）、17（Cr02）、18（Cr04）、19（閩豐1號）、20（滬農(nóng)1號），主要來自上海農(nóng)科院食用菌研究所和福建三明真菌所，且多為中高溫早熟型。第2組為14（241）、15（241-4）、16（慶科20）、21（浙香939-9）、22（浙香939-6），主要來自浙江慶元食用菌科研中心和麗

4、水食用菌研究開發(fā)中心，多為中低溫晚熟型。
　　 基于RAPD、ISSR、SRAP及三種標(biāo)記綜合分析所得到數(shù)據(jù)的UPGMA聚類結(jié)果基本一致，聚類圖具有類似的結(jié)構(gòu)，且與系譜關(guān)系相一致，表明三種標(biāo)記技術(shù)均可用于香菇菌株遺傳多樣性分析。出自同一育種機構(gòu)的菌株優(yōu)先聚在一起，菌株間相似系數(shù)較高。上述表明23個香菇菌株的遺傳多樣性水平較低，彼此之間親緣關(guān)系較近。
　　 2．以16個靈芝菌株菌絲體DNA為材料，采用ITS5/ITS4引物

5、及PCR技術(shù)，擴增各菌株ITS序列。擴增序列遺傳多樣性分析表明，16個靈芝菌株轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS1+ITS2）對位排列后總長度為490bp的序列中，共有139個變異位點，占28.3％，其中IST1和1TS2變異位點數(shù)目分別為66和73；保守位點數(shù)為351，占71.7％；59個信息位點，占12.0％；16個靈芝菌株在多處發(fā)生轉(zhuǎn)換和顛換現(xiàn)象，共86個轉(zhuǎn)換位點（G-A，C-T），13個顛換位點（C-G,T-A），ITS1區(qū)的轉(zhuǎn)換/顛換比值高于

6、ITS2區(qū)，而ITS2的變異位點多于ITS1變異位點.
　　 采用DNAman分析軟件對16個靈芝菌株的ITS序列進行比對分析，發(fā)現(xiàn)供試菌株的遺傳距離在0.000-0.121之間，樹舌靈芝與靈芝F-1的遺傳距離最小，為0.000，兩者可能為同種異名菌株；黒芝02與惠州的遺傳距離最大，為0.121；黒芝02與京大的遺傳距離為0.117，與薄蓋靈芝的遺傳距離為0.120。
　　 采用MEGA（version 2.1）軟件將1

7、6個靈芝菌株分成4個類群。第一類群共12個菌株，包括信州、惠州、京大、靈芝902、靈芝F-1、仙芝、美羅、圓芝、泰山靈芝、樹舌靈芝、赤芝05、黃邊靈芝；黑芝02、紫芝01兩個聚為一個類群；薄蓋靈芝和中芝分別獨立聚為一個類群。
　　 上述結(jié)果顯示，靈芝16個菌株各聚類組間存在一定得遺傳差異，但組內(nèi)菌株間遺傳多樣性水平較低，彼此之間親緣關(guān)系較近。
　　 3．應(yīng)用原生質(zhì)體融合技術(shù)以赤芝05和06為親本進行育種研究，經(jīng)拮抗試驗驗

8、證共得到30個融合子，并以赤芝05和赤芝06融合子及親本DNA為材料，采用153個SRAP引物組合對融合子進行篩選鑒定，共篩選到4個清晰穩(wěn)定、且含有兩個親本各自特異DNA條帶的SRAP引物組合。將其用于融合子鑒定，結(jié)果表明：除共有條帶外，2個只與親本赤芝05有拮抗的融合子產(chǎn)生了赤芝06的特異條帶；2個只與親本赤芝06有拮抗的融合子產(chǎn)生了赤芝05的特異條帶；在30個與雙親均有拮抗的融合子中，有7個融合子中同時出現(xiàn)雙親特異條帶，即此7個融合