1、糖尿病。腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最為常見而嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一。DM人群的DN發(fā)生率為20％～40％,是患者的主要死因之一。其主要特征是尿蛋白增加和腎小球硬化。
　　 微循環(huán)是指微血管即微動(dòng)脈和微靜脈之間的血液循環(huán),是血液與組織細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)交換的場(chǎng)所。微循環(huán)血流不暢指微循環(huán)血流流速、血管形態(tài)和功能異常。微循環(huán)障礙與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系

2、。
　　 DN微血管病變時(shí),其血栓素增高,血小板功能亢進(jìn),血管收縮,血小板聚集,血液高凝,血流緩慢,以致血流在血管內(nèi)中斷,腎臟的氧氣、養(yǎng)料等不能得到有效運(yùn)輸,無法傳遞能量,排除廢物,導(dǎo)致DN病情加重,最終發(fā)展為終末期腎病。
　　 雙清的主要成分為決明子、黃精、桑葉、菊花、葛根、山藥、蘆根等。其中的多味中藥均具有顯著的活血化瘀的作用,可有效軟化血管、改善微循環(huán),預(yù)防和治療糖尿病微循環(huán)障礙的發(fā)生。
　　 本實(shí)驗(yàn)第一部

3、分采用單側(cè)腎臟切除加鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病腎病大鼠模型,通過灌胃給藥治療,以期證明雙清對(duì)早期糖尿病腎病的作用;第二部分通過觀察小鼠給藥后耳廓細(xì)血管口徑以及血流速度等的改變,證明雙清對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響。
　　 第一部分雙清對(duì)早期糖尿病腎病作用的研究
　　 目的:觀察雙清對(duì)早期糖尿病腎病大鼠血糖升高和腎臟損傷的防治作用。
　　 方法:選取健康雄性Wistar大鼠80只,體重220±20g,除11只作為正常

4、對(duì)照組,其余各只大鼠常規(guī)消毒,1％戊巴比妥鈉麻醉后,行左側(cè)腎臟切除術(shù),切除后每只給予1ml注射用青霉素鈉防止感染。兩周后,切除腎臟的大鼠空腹12h后,按50mg/kg腹腔注射1％STZ枸櫞酸緩沖溶液。3天后大鼠空腹12h眼眶取血測(cè)血糖,血糖值≥11.1mmol/L作為糖尿病成模大鼠,其余建模不成功者予以剔除。成模大鼠分為5組:陽性對(duì)照組灌胃8mg/kg纈沙坦+1mg/kg格列本脲,雙清高(SQ-H)、中(SQ-M)、低(SQ-L)組分別

5、灌胃4g/kg、2g/kg、1g/kg雙清,模型對(duì)照組以蒸餾水灌胃。正常對(duì)照組亦灌胃給予蒸餾水。各組均按1ml/100g給藥。每日灌胃給藥一次,連續(xù)給藥4周,正常進(jìn)食飲水。
　　 結(jié)果:
　　 1大鼠狀態(tài)及體重變化:模型對(duì)照組大鼠明顯消瘦,多飲、多食、多尿,具有典型的“三多一少”表現(xiàn);大鼠精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,蜷臥拱背,毛發(fā)無光澤。陽性對(duì)照組和雙清組大鼠也有類似情況,隨著給藥時(shí)間增加,狀態(tài)略有好轉(zhuǎn)。正常對(duì)照組大鼠狀態(tài)良好。

6、
　　 實(shí)驗(yàn)開始時(shí),各組隨機(jī)分配,體重均無顯著性差異;實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),正常組(321±23)、陽性藥組(298±49)和雙清高劑量組(279±46)體重均明顯高于模型組(225±37)(P＜0.05)。
　　 2血糖變化:給藥4周后,模型對(duì)照組血糖值(35.2±10.9)顯著高于正常對(duì)照組(4.34±0.7,P＜0.05),雙清高、中、低劑量組血糖值分別為16.3±5.4、17.0±9.6、19.2±7.8,陽性對(duì)照組血糖值

7、為6.5±2.2,與模型對(duì)照組比較均明顯降低(P＜0.05)。
　　 3腎臟指標(biāo):給藥4周后,模型對(duì)照組(0.64±0.07)的腎體比明顯高于正常對(duì)照組(0.25±0.04,P＜0.05),與陽性對(duì)照組(0.46±0.09)和雙清高劑量組(0.51±0.06)的。腎體比比較也明顯偏高(P＜0.05);模型組大鼠的24h尿蛋白(227±47)含量與正常對(duì)照組(32±12)比較有顯著性差異(P＜0.05),也明顯高于陽性藥組(31±

8、12)和雙清高(120±47)、中(83±63)劑量組的大鼠24h尿蛋白(P＜0.05);血清中,模型對(duì)照組(12.0±2.1)的尿素氮(BUN)高于正常對(duì)照組(6.0±2.1,P＜0.05),也高于陽性對(duì)照組(7.7±1.4)的BUN(P＜0.05)。
　　 4病理切片:病理切片顯示,模型對(duì)照組腎小球增大,腎小管上皮細(xì)胞水腫嚴(yán)重,腎間質(zhì)充血。陽性對(duì)照組與模型組比較腎小球較小、形態(tài)規(guī)則,腎小管上皮細(xì)胞水腫不明顯,腎間質(zhì)充血也較輕

9、;正常對(duì)照組腎小球未見增大,無水腫、充血等現(xiàn)象。雙清中、高劑量組各項(xiàng)指標(biāo)與模型組比較明顯改善,雙清低劑量組作用不明顯,與模型組接近。
　　 結(jié)論:給藥4周后,雙清對(duì)早期糖尿病腎病大鼠血糖有降低作用;對(duì)其腎臟具有保護(hù)作用,且呈劑量依賴性。
　　 目的:觀察雙清對(duì)小鼠耳廓血管的擴(kuò)張作用,以及對(duì)血流速度等的影響。
　　 方法:將昆明小鼠分為5組,每組8只,正常對(duì)照組給予生理鹽水,陽性對(duì)照組給予50mg/kg復(fù)方丹參片水

10、溶液。雙清高、中、低組分別給予6.4g/kg、3.2g/kg、1.6g/kg雙清水溶藥液,各組均按0.2ml/10g腹腔注射給藥。
　　 1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,用醫(yī)用橡皮膏貼在小鼠耳廓上去毛,將小鼠腹部向下固定在小鼠觀察臺(tái)上,耳廓表面滴加少許液體石蠟。各組分別腹腔注射生理鹽水、復(fù)方丹參或雙清水溶液,微循環(huán)顯微鏡觀察注射前后同一部位耳廓微循環(huán)微動(dòng)脈(A)、微靜脈(V)口徑,流速變化。拍照記錄給藥前(0min)及給藥后10、

11、20、30min時(shí)耳廓微循環(huán)微動(dòng)脈、微靜脈圖像,并用醫(yī)學(xué)影像處理系統(tǒng)測(cè)量血管口徑,比較給藥前后以及各組間差異。
　　 結(jié)果:
　　 1微靜脈口徑變化:正常對(duì)照組微靜脈各時(shí)間點(diǎn)口徑與0min比較均無顯著性差異。陽性對(duì)照組微靜脈口徑10min(50.81)時(shí)與Omin(48.44)比較明顯擴(kuò)張(P＜0.05),20min(50.69)和30min(50.44)時(shí)與0min比較擴(kuò)張極明顯(P＜0.01)。雙清低劑量組微靜脈各時(shí)

12、間點(diǎn)口徑與0min比較均無顯著性差異。雙清中劑量組微靜脈10min(53.61)、20min(54.00)、30min(53.44)口徑與0min(50.50)比較均有明顯擴(kuò)張(P＜0.05)。雙清高劑量組微靜脈10min(59.00)和20min(59.21)口徑與0min(56.36)比較均明顯擴(kuò)張(P＜0.05),30min與0min比較無顯著性差異。
　　 2微動(dòng)脈口徑變化:正常對(duì)照組微動(dòng)脈各時(shí)間點(diǎn)口徑與0min比較均無

13、顯著性差異。陽性對(duì)照組微動(dòng)脈口徑10min(30.00)時(shí)與0min(27.69)比較明顯擴(kuò)張(P＜0.05),20min(31.50)和30min(32.00)時(shí)與0min比較擴(kuò)張極明顯(P＜0.01)。雙清低劑量組微動(dòng)脈各時(shí)間點(diǎn)口徑與0min比較均無顯著性差異。雙清中劑量組微動(dòng)脈10min(24.67)和20min(24.94)口徑與0min(21.11)比較明顯擴(kuò)張(P＜0.05),30min(25.89)與0min比較有極顯著性

14、差異(P＜0.01)。雙清高劑量組微動(dòng)脈10min口徑與0min比較無顯著性差異,20min(35.50)和30min(35.57)口徑與0min(32.50)比較有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3血流變化:給予生理鹽水和低劑量雙清后,小鼠耳廓微動(dòng)脈、微靜脈血流流速無明顯變化;毛細(xì)血管開放數(shù)目也沒有明顯增多。給予雙清中、高劑量和陽性對(duì)照藥后,可見半小時(shí)內(nèi)小鼠耳廓微動(dòng)脈、微靜脈中血流速度變快,血管均逐漸充盈,可以觀察到的毛細(xì)