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1、目的:觀察重組共表達(dá)質(zhì)粒LRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)后的表達(dá)及其對(duì)大鼠MSCs向成骨細(xì)胞分化的影響,為骨缺損的聯(lián)合基因治療奠定基礎(chǔ)。 方法:使用全骨髓培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)大鼠MSCs;流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs表面標(biāo)志抗原的表達(dá);重組共表達(dá)質(zhì)粒pLRS-hVEGF121cDNA/hBMP-4經(jīng)酶切鑒定后,在脂質(zhì)體介導(dǎo)下將其轉(zhuǎn)入大鼠MSC
2、s,提取總RNA和總蛋白,進(jìn)行RT-PCR和Westem blot檢測(cè);茜素紅染色檢測(cè)轉(zhuǎn)染后大鼠MSCs的成骨分化能力。 結(jié)果:流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示CD90表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性,CD45表達(dá)陰性;重組共表達(dá)質(zhì)粒plRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4成功轉(zhuǎn)染至大鼠MSCs中,并獲得有效轉(zhuǎn)錄和共表達(dá);轉(zhuǎn)染后第14天,茜素紅染色陽(yáng)性。 結(jié)論: hVEGF121和hBMP-4在大鼠MSCs中獲有效轉(zhuǎn)錄和共表達(dá),并能誘導(dǎo)大鼠MSC
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