1、本文以丹參葉片愈傷組織為材料，細(xì)胞懸浮培養(yǎng)為手段，探討了水解酪蛋白(Caseinacidshydrolysate，CAH)、鈷離子(Co2+)、丹參根腐病病原菌(Fusariumsolani，F(xiàn)S)、密環(huán)菌(Armillariamellea，AM)和水楊酸(salicylicacid，SA))等5種誘導(dǎo)子對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、丹參酚酸類(lèi)化合物的合成積累、酚酸類(lèi)化合物代謝途徑苯丙氨酸解氨酶(PAL)、酪氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(TAT)、肉桂酸4-羥化

2、酶(C4H)、多酚氧化酶(PPO)四種酶的活性以及與細(xì)胞抗氧化相關(guān)酶活性的影響。為提高培養(yǎng)細(xì)胞中丹參酚酸類(lèi)化合物(丹酚酸B、咖啡酸)的含量及調(diào)控酚酸類(lèi)的代謝提供依據(jù)。 1.丹參酚酸類(lèi)化合物合成代謝途徑相關(guān)酶PAL、TAT、C4H、PPO的測(cè)定條件為：PAL，的最適緩沖液pH8.8、酶促反應(yīng)溫度37℃、酶促反應(yīng)時(shí)間60min、底物苯丙氨酸濃度為20mmol·L-1；TAT的最適緩沖液pH7.3、酶促反應(yīng)溫度37℃、酶促反應(yīng)時(shí)間30

3、min、底物α-酮戊二酸濃度為17mmol·L-1；C4H的最適緩沖液pH7.6、酶促反應(yīng)溫度30℃、酶促反應(yīng)時(shí)間30min、底物肉桂酸濃度為25mmol·L-1；TAT的最適緩沖液pH6.0、酶促反應(yīng)溫度30℃、酶促反應(yīng)時(shí)間30min、底物鄰苯二酚濃度為10mmol·L-1。 2.水解酪蛋白、密環(huán)菌、丹參根腐病病原菌誘導(dǎo)子在一定濃度下誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)量增加，但是濃度過(guò)高抑制生長(zhǎng)。鈷離子、水楊酸誘導(dǎo)子抑制培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)，且隨濃度

4、的增大，抑制作用增強(qiáng)。培養(yǎng)液pH隨水解酪蛋白誘導(dǎo)子濃度而提高，呈先上升后下降的趨勢(shì)；隨丹參根腐病病原菌誘導(dǎo)子濃度增大而降低；密環(huán)菌誘導(dǎo)子處理對(duì)pH變化不顯著；鈷離子和水楊酸處理導(dǎo)致懸浮培養(yǎng)液酸化，pH變化隨鈷離子、水楊酸的濃度增大而逐漸增大。誘導(dǎo)子處理均使細(xì)胞培養(yǎng)液的電導(dǎo)率減小，隨水解酪蛋白、水楊酸誘導(dǎo)子濃度增大呈先降低后增大的趨勢(shì)，而密環(huán)菌和鈷離子誘導(dǎo)子處理引起電導(dǎo)率的變化差異不顯著；培養(yǎng)液的電導(dǎo)率隨丹參根腐病病原菌處理濃度的增大而急

5、劇降低。 3.5種誘導(dǎo)子對(duì)咖啡酸和丹酚酸B含量影響差異顯著。水解酪蛋白、水楊酸、鈷離子誘導(dǎo)子在低濃度時(shí)誘導(dǎo)咖啡酸和丹酚酸B的合成積累，高濃度時(shí)表現(xiàn)出抑制效果；水楊酸可誘導(dǎo)酚酸類(lèi)化合物分泌到培養(yǎng)細(xì)胞外；丹參根腐病病原菌可誘導(dǎo)咖啡酸和丹酚酸B的合成積累；蜜環(huán)菌抑制咖啡酸的合成，對(duì)丹酚酸B含量影響不顯著。 4.外源水楊酸處理誘導(dǎo)丹參PAL、TAT,PPO活性的升高，且隨著水楊酸濃度的增大，誘導(dǎo)高峰越提前；PAL、TAT活性與丹

6、參咖啡酸、丹酚酸B含量呈正相關(guān)，說(shuō)明PAL、TAT是丹參苯丙烷代謝途徑關(guān)鍵酶；外源水楊酸處理抑制C4H活性，C4H活性與咖啡酸、丹酚酸B含量呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明C4H不是丹參苯丙烷代謝途徑關(guān)鍵酶。 5.水楊酸誘導(dǎo)子誘導(dǎo)SOD、POD、CAT活性升高，但誘導(dǎo)時(shí)間和強(qiáng)度與水楊酸的濃度有關(guān)，具有差異性。水楊酸誘導(dǎo)子濃度越大，誘導(dǎo)SOD活性高峰出現(xiàn)時(shí)間越早；不同濃度的水楊酸誘導(dǎo)POD活性高峰均出現(xiàn)在8h；誘導(dǎo)CAT活性高峰與濃度成負(fù)相關(guān)，即濃