1、金黃色葡萄球菌是一種革蘭氏陽性菌，是人類化膿感染中最常見的病原菌。美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。近年來，很多快速、靈敏檢測金黃色葡萄球菌的方法在生物醫(yī)學分析領(lǐng)域中發(fā)揮了重要作用，尤其是一些利用抗體-抗原識別原理發(fā)展的生物傳感方法，如原子力顯微鏡法、酶聯(lián)免疫吸附法、表面等離子體共振法及熒光免疫測定法等。然而基于抗體-抗原識別原理發(fā)展的金黃色葡萄球菌生物傳感方法由于抗體的難合成、不易修飾、生物活性

2、不穩(wěn)定且成本高等而導(dǎo)致其存在一定的局限性。核酸適配體(Aptamer)作為一種新型特異性識別分子具有高穩(wěn)定性、高選擇性，且穩(wěn)定性好、合成簡便、容易標記、適用性廣等優(yōu)點，為發(fā)展快速、靈敏的金黃色葡萄球菌檢測方法提供了新的思路。然而目前報道的基于Aptamer特異性識別的金黃色葡萄球菌檢測方法主要是電化學傳感法和熒光光譜測定法，這些方法操作復(fù)雜，且不能實現(xiàn)高通量檢測。雙色流式細胞術(shù)能對細胞或者其他生物粒子進行定性、定量分析。與傳統(tǒng)的檢測方法

3、相比，具有免洗和速度快等優(yōu)點，成為當代先進的細胞、生物粒子定量分析技術(shù)之一。同時，融合介電電泳原理和微流控芯片技術(shù)發(fā)展介電泳驅(qū)動在線富集技術(shù)能對細胞、細菌等復(fù)雜生化樣品進行高效迅速富集和分離，為建立快速、靈敏的細菌體系檢測提供了技術(shù)平臺。本論文即以實現(xiàn)金黃色葡萄球菌的快速、靈敏檢測為研究目標，采用Aptamer作為特異性識別分子，結(jié)合本課題組已發(fā)展的基于熒光納米顆粒標記信號放大技術(shù)的雙色流式細胞術(shù)和基于熒光納米顆粒標記信號放大技術(shù)的微流

4、控芯片介電電泳富集技術(shù)，開展了基于Aptamer/二氧化硅熒光納米探針的金黃色葡萄球菌檢測研究，主要工作如下:
　　一、基于Aptamer/二氧化硅熒光納米探針的雙色流式細胞術(shù)用于金黃色葡萄球菌檢測研究
　　以Aptamer作為特異性分子識別探針，結(jié)合課題組的熒光納米顆粒標記雙色流式細胞術(shù)發(fā)展了一種快速、靈敏的金黃色葡萄球菌檢測方法。在該方法中，首先采用點擊化學反應(yīng)將特異性識別金黃色葡萄球菌的Aptamer修飾在二氧化硅熒光

5、納米顆粒表面，獲得Aptamer/二氧化硅熒光納米探針復(fù)合物，然后考察該復(fù)合物探針對金黃色葡萄球菌的特異性識別，并通過激光共聚焦顯微鏡成像實驗證實識別效果。在此基礎(chǔ)上，將Aptamer/二氧化硅熒光納米探針與金黃色葡萄球菌樣品進行孵育，然后以核酸染料SYBRGreenⅠ對熒光標記的金黃色葡萄球菌進行核酸染色，通過雙參數(shù)流式細胞術(shù)對樣品中雙色標記的金黃色葡萄球菌進行分析檢測。結(jié)果表明，該Aptamer/二氧化硅熒光納米探針具有非常高的選擇

6、性和靈敏度，以核酸染料對細菌進行染色，顯著地減小了由納米顆粒團聚所引起的假陽性信號，對緩沖液體系和牛奶樣品中摻雜金黃色葡萄球菌的檢測下限分別為1.5×102和7.6×102cellsmL-1。與基于抗體-抗原免疫反應(yīng)的傳統(tǒng)流式細胞術(shù)相比，該方法具有更高的檢測靈敏度。
　　二、基于Aptamer/二氧化硅熒光納米探針的微流控芯片介電電泳富集技術(shù)用于金黃色葡萄球菌檢測研究
　　以Aptamer作為特異性分子識別探針，結(jié)合課題組的

7、熒光納米顆粒標記信號放大的微流控芯片介電電泳富集技術(shù)發(fā)展了一種金黃色葡萄球菌的實時、連續(xù)、快速和高靈敏檢測新方法。在該方法中，先將Aptamer/二氧化硅熒光納米探針復(fù)合物與金黃色葡萄球菌進行孵育，通過Aptamer對目標金黃色葡萄球菌的特異性識別，從而將Aptamer/二氧化硅熒光納米探針復(fù)合物標記到金黃色葡萄球菌上進行熒光信號放大，然后將該樣品通入到微流控芯片中，并采用介電電泳驅(qū)動技術(shù)對金黃色葡萄球菌進行實時、定向富集;最后通過監(jiān)測