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1、目的:本研究主要探討人脂聯(lián)素重組體(Adiponectin)對(duì)MG-63細(xì)胞單磷酸腺苷激活的蛋白激酶(Adenosine monophosphate activatedprotein kinase,AMPK)、乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl carboxylase,ACC)磷酸化和細(xì)胞增殖的影響。
方法:選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MG-63細(xì)胞、SaOS-2細(xì)胞、hFOB1.19細(xì)胞,提取蛋白后Western Blot檢測(cè)三種細(xì)
2、胞脂聯(lián)素受體1(Adiponectin receptorl,AdipoR1)的表達(dá)水平。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨肉瘤細(xì)胞株MG-63中分別加入5ml含脂聯(lián)素的培養(yǎng)基(濃度1ug/ml),處理不同的時(shí)間,Western Blot檢測(cè)AMPK、ACC蛋白磷酸化水平,選擇最佳的脂聯(lián)素處理時(shí)間;根據(jù)脂聯(lián)素最佳處理時(shí)間,選擇不同濃度的脂聯(lián)素作用于呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的MG-63細(xì)胞Western Blot檢測(cè)AMPK、ACC磷酸化水平,確定脂聯(lián)素最佳作用濃度。依據(jù)
3、最佳作用時(shí)間及最佳濃度,將PBS作為對(duì)照,相應(yīng)濃度脂聯(lián)素作處理組,Western Blot檢測(cè)AMPK、ACC磷酸化水平,明確脂聯(lián)素對(duì)骨肉瘤MG-63細(xì)胞AMPK、ACC磷酸化的影響。CCK-8法檢測(cè)脂聯(lián)素對(duì)MG-63細(xì)胞增殖的影響。
結(jié)果:與正常成骨細(xì)胞hFOB1.19相比,骨肉瘤細(xì)胞株MG-63細(xì)胞和SaOS-2細(xì)胞AdipoR1水平顯著增高(MG-63細(xì)胞:P=0.001;SaOS-2細(xì)胞:P=0.001);脂聯(lián)素對(duì)
4、MG-63細(xì)胞最佳作用時(shí)間30min(P=0.005),最佳作用濃度0.1ug/ml(P=0.007),與對(duì)照組相比,脂聯(lián)素組可以顯著促進(jìn)MG-63細(xì)胞AMPK(P=0.001)、ACC(P=0.001)磷酸化;短時(shí)間內(nèi)(24h)脂聯(lián)素對(duì)MG-63細(xì)胞增殖無(wú)明顯抑制作用(P>0.05)。
結(jié)論:AdipoR1在骨肉瘤細(xì)胞中表達(dá)水平高于正常成骨細(xì)胞;一定濃度的脂聯(lián)素可以增強(qiáng)AMPK、ACC的磷酸化,短時(shí)間刺激脂聯(lián)素對(duì)MG-6
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