1、細(xì)胞凋亡是一種由多種基因共同調(diào)控的自身編碼的死亡方式，確保了正常的胚胎發(fā)育和機(jī)體內(nèi)環(huán)境的自身穩(wěn)定。在形態(tài)學(xué)上，DNA的片段化為細(xì)胞凋亡的特征性表現(xiàn)。DFF40（DNA fragmentation factor 40）是一種DNA酶，在DNA片段化過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。CIDE（cell death-inducing DFF45-like effector）家族蛋白同DFF蛋白在多肽鏈的N端具有同源性，是細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子中的一個(gè)新成員

2、，現(xiàn)在已知的CIDE蛋白中，人類(lèi)有CIDE-A、CIDE-B和CIDE-3。其中人CIDE-3基因于2003年發(fā)現(xiàn)，其在GenBank中的登錄號(hào)為AC007783，位于人類(lèi)3p25染色體上，全長(zhǎng)約169 kb，人CIDE-3基因cDNA含有1305個(gè)堿基，存在選擇性剪切，具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能。但是，人CIDE-3基因在組織中的分布、其生理和病理功能以及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系目前還不清楚。 為此本研究通過(guò)RT-PCR方法獲得人CIDE

3、-3的編碼區(qū)基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體，經(jīng)測(cè)序和酶切鑒定后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行體外表達(dá)，獲得了人CIDE-3原核表達(dá)蛋白。免疫新西蘭大白兔，制備出多克隆抗體，經(jīng)鑒定后，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法初步了解了人CIDE-3蛋白在人類(lèi)部分正常組織和部分腫瘤組織中的分布。 本文研究結(jié)果： 1. 構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET28a(+)-CIDE-3。經(jīng)酶切鑒定和DNA 測(cè)序，目的基因片段的序列同GenBank中登錄的相應(yīng)序列完全吻合。 2

4、. 在大腸桿菌中表達(dá)了人CIDE-3蛋白N端的172個(gè)氨基酸，由Ni-NTA Agarose (pH 8.0)純化。SDS-PAGE和Western blot證實(shí)獲得了純化的人CIDE-3蛋白。 3. 制備兔抗人CIDE-3蛋白多克隆抗體，ELISA結(jié)果顯示，該多克隆抗體效價(jià)高于1:30000，具有較高的親和性；Western blot結(jié)果顯示，該多克隆抗體可以與人CIDE-3蛋白特異性結(jié)合。免疫組織化學(xué)染色，結(jié)果顯示人CIDE

5、-3蛋白分布于部分胃粘膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，屬于細(xì)胞質(zhì)蛋白；通過(guò)比較胃組織連續(xù)切片的免疫組織化學(xué)染色片和HE 染色片推測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞可能為胃粘膜壁細(xì)胞。 4. 人CIDE-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)于腎臟腎小管上皮細(xì)胞（5/5例）（腎皮質(zhì)2例、腎髓質(zhì)3例陽(yáng)性染色）；食道粘膜鱗狀上皮細(xì)胞（5/5例）、心?。?/5例）、結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞（7/10例）、胰腺（3/5例）（胰島1例、胰腺外分泌腺體2例陽(yáng)性染色）和肝（2/5例）。陽(yáng)性物質(zhì)均位于細(xì)胞胞質(zhì)中

6、，呈棕黃色顆粒狀。腦（0/5例）和肺組織（0/5例）未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。 5. 人CIDE-3蛋白還存在于原發(fā)性肝細(xì)胞癌（hepatic cell carcinoma，HCC）（10/37例）、胃腺癌（4/19例）和乳腺癌（1/17例），HCC細(xì)胞中人CIDE-3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率（10/37例）顯著低于癌旁肝細(xì)胞（28/29例）（P<0.05），其中各分化階段HCC細(xì)胞（高、中、低分化）中人CIDE-3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別低于癌旁肝細(xì)