1、[目的]
　　 本研究擬通過(guò)體外培養(yǎng)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)、設(shè)計(jì)并建立低氧培養(yǎng)細(xì)胞模型和不同低氧時(shí)間不同藥物處理PASMCs,研究低氧對(duì)PASMCs增殖、腺苷A2b受體(A2bAR)表達(dá)變化及其激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞增殖的影響,從而為腺苷類藥物治療HPH提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。
　　 [方法]
　　 1.采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)PASMCs,免疫組化法鑒定細(xì)胞。
　　 2.用真空壓縮袋制作低氧培養(yǎng)細(xì)胞的模擬模

2、型裝置,測(cè)定細(xì)胞增殖來(lái)驗(yàn)證該設(shè)計(jì)的可行性。
　　 3.實(shí)驗(yàn)分組:首先設(shè)空白組、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,然后隨機(jī)分為低氧組(Hypoxia,H組)和常氧組(Normal,N組),將H組和N組分別進(jìn)行A2bAR非特異性激動(dòng)劑(CV-1808)和A2bAR特異性拮抗劑(MRS1754)處理后在不同環(huán)境培養(yǎng),時(shí)間點(diǎn)設(shè)為0h、6h、24h、48h、72h。
　　 4.采用免疫熒光的方法,在激光共聚焦顯微鏡下觀察低氧不同時(shí)間下A2bAR在P

3、ASMCs上的分布情況和表達(dá)量的變化,及PASMCs的形態(tài)變化。
　　 5.用Cell Counting試劑盒(CCK-8法)檢測(cè)低氧不同時(shí)間經(jīng)不同藥物處理的PASMCs的增殖變化情況。
　　 [結(jié)果]
　　 1.原代培養(yǎng)的PASMCs傳代后穩(wěn)定性好,純度高可達(dá)99％以上,免疫組化鑒定α-actin呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。
　　 2.激光共聚焦顯微鏡下觀察到,低氧下PASMCs有從長(zhǎng)梭過(guò)度到短梭形的趨勢(shì),未出現(xiàn)典型

4、生長(zhǎng)方式,不出現(xiàn)或遲于常氧培養(yǎng)細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。
　　 3.免疫熒光法檢測(cè)到A2bAR在PASMCs胞膜、胞漿均有表達(dá),胞膜表達(dá)稍多。低氧下A2bAR表達(dá)增加,具有時(shí)間依賴性,但是持續(xù)時(shí)間較短。
　　 4.CCK-8法結(jié)果顯示,低氧下細(xì)胞增殖明顯高于常氧(P＜0.0001),低氧下CV-1808處理組可顯著抑制細(xì)胞增殖(P＜0.0001)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.低氧下PASMCs形態(tài)和生長(zhǎng)方式改變,提示