1、復發(fā)和轉移是腫瘤患者死亡的主要原因，腫瘤細胞的惡性程度、轉移能力與患者預后密切相關，然而目前惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及其轉移的分子機制仍然未明。上皮細胞-間充質轉化(epithelial-to-mesenchymaltransition，EMT)是上皮性腫瘤細胞侵襲和轉移過程中的關鍵步驟，阻止或逆轉腫瘤細胞發(fā)生上皮細胞-間充質轉化對控制腫瘤侵襲和轉移至關重要，但是目前EMT的發(fā)生及其調控機制還不明確。干擾素調節(jié)因子4結合蛋白(Interfe

2、ronregulatoryfactor-4bindingprotein，IBP)是能夠激活RhoGTPase家族中Rac1、RhoA和Cdc42的GEF(鳥苷酸交換因子)分子。研究發(fā)現(xiàn)IBP在免疫系統(tǒng)中具有重要的功能，IBP對免疫穩(wěn)態(tài)的維持不可或缺，IBP敲除小鼠出現(xiàn)血清IgG水平升高、自身抗體產生、效應T細胞和記憶T細胞積聚等系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣自身免疫性疾病的癥狀;IBP參與免疫突觸形成、T淋巴細胞激活及Th1/Th2細胞極化的調控;I

3、BP與激活的Rac1協(xié)同調節(jié)細胞形態(tài)，同整合素共同影響細胞的分化;近期研究還發(fā)現(xiàn)IBP參與翻譯后修飾的調控。目前對IBP的研究主要集中于免疫系統(tǒng)，我們首次報道了IBP與乳腺腫瘤細胞惡性行為密切相關，那么IBP是否參與了腫瘤侵襲與轉移的關鍵步驟EMT的調控，本研究擬對乳腺癌臨床標本中的IBP表達模式做進一步的分析，通過一系列體內體外實驗研究IBP調控乳腺癌細胞EMT的分子機制，為闡明IBP在乳腺癌中的作用奠定基礎。
　　主要研究內容

4、和結果
　　1.乳腺癌組織芯片和乳腺癌細胞株分析
　　1)將109例乳腺癌原發(fā)灶和淋巴結轉移灶腫瘤組織做IBP免疫組化染色，并根據(jù)染色強度和陽性細胞比例進行計分評價，通過對原發(fā)灶和轉移灶進行組間比較，發(fā)現(xiàn)轉移灶中IBP表達強度明顯高于原發(fā)灶(p＜0.001)。
　　2)將20例有預后資料的乳腺癌患者腫瘤組織做IBP免疫組織化學染色，并根據(jù)染色強度和陽性細胞比例進行計分評價，通過對免疫組織化學染色結果和患者預后資料進行K

5、aplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)IBP表達強度與乳腺癌患者生存率相關，IBP表達水平高的患者生存率低于IBP表達低的患者(p=0.041)。
　　3)選取9株人乳腺癌細胞和正常人乳腺上皮細胞進行免疫印跡分析，發(fā)現(xiàn)在轉移性較強的乳腺癌細胞中IBP表達水平高;在轉移性相對低的乳腺癌細胞中IBP表達水平低，正常人乳腺上皮細胞中未檢測到IBP的表達。
　　2.IBP調控乳腺癌細胞EMT及其分子機制
　　1)通過免疫印跡和細胞

6、免疫熒光分析發(fā)現(xiàn)IBP調節(jié)乳腺癌細胞EMT分子標志(E-cadherin，Keratin18，F(xiàn)ibronectin，N-cadherin，Vimentin)的表達水平。
　　2)通過相差顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)IBP改變乳腺癌細胞的EMT表型。
　　3)EGF刺激引起乳腺癌細胞中Fibronectin的表達水平升高，誘導細胞發(fā)生EMT，同時，IBP在EGF誘導的乳腺癌細胞EMT過程中表達水平顯著升高。
　　4)EGF活化乳腺

7、癌細胞中EGFR信號通路，通過免疫印跡對EGFR酪氨酸磷酸化位點1068、1173，ERK1/2和p38MAPK的磷酸化水平進行觀察發(fā)現(xiàn):IBP影響EGF誘導的EGFR及其下游信號分子的活化。
　　5)利用Real-timePCR技術發(fā)現(xiàn)乳腺癌細胞中IBP抑制后EMT相關轉錄因子Snail、Slug、ZEB1和ZEB2的表達水平會不同程度降低。
　　6)通過Transwell實驗發(fā)現(xiàn)IBP促進乳腺癌細胞遷移和侵襲;利用免疫印

8、跡技術發(fā)現(xiàn)IBP促進乳腺癌細胞中金屬蛋白酶的表達。
　　7)利用免疫熒光技術我們觀察了IBP對細胞骨架蛋白微管和微絲的影響，結果發(fā)現(xiàn):IBP調節(jié)細胞骨架重排，IBP促進偽足的形成，IBP抑制會引起乳腺癌細胞骨架排列紊亂。
　　8)利用G-ELISA技術分析IBP對Rac1，RhoA和Cdc42活性水平的影響:乳腺癌細胞中IBP通過其GEF活性調控Rac1，RhoA和Cdc42的活化。
　　3.IBP影響乳腺癌細胞成瘤和

9、轉移能力
　　1)利用裸鼠皮下成瘤動物模型觀察IBP對乳腺癌細胞成瘤能力的影響，發(fā)現(xiàn)抑制IBP能夠降低乳腺癌細胞的皮下成瘤能力。
　　2)利用裸鼠尾靜脈注射腫瘤細胞動物模型觀察IBP對乳腺癌細胞體內轉移能力的影響，發(fā)現(xiàn)抑制IBP能夠降低乳腺癌細胞的體內轉移能力。
　　綜上所述，本研究證實IBP與乳腺腫瘤細胞的惡性行為密切相關，IBP高水平表達提示患者預后不良;利用一系列體內外實驗證明IBP通過活化Rac1，RhoA和C