1、目的：探討乳源免疫調(diào)節(jié)肽(PGPIPN)對(duì)人卵巢癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,探討PGPIPN抑制卵巢癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的可能分子機(jī)制。
　　方法：Transwell小室測(cè)定其侵襲力和遷移力,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力,細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的克隆形成能力,MTT法比較PGPIPN對(duì)細(xì)胞株SKOV3、人正常肝細(xì)胞株LO2、小鼠永生化成纖維細(xì)胞株(MEFS)、原代卵巢癌細(xì)胞、原代乳腺癌細(xì)胞和原代卵巢癌旁組織細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況,檢測(cè)PGP

2、IPN的細(xì)胞毒性,PCR和westernblot檢測(cè)MTA1與NM23H1基因的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：Transwell試驗(yàn)中,與空白對(duì)照組相比,濃度為1μg·ml-1和10μg·ml-1的PGPIPN明顯抑制了卵巢癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移(p<0.01),抑制率細(xì)胞株SKOV3分別為20.20％和23.78%,原代卵巢癌細(xì)胞為23.56%和27.11%;劃痕實(shí)驗(yàn)顯示對(duì)細(xì)胞株的運(yùn)動(dòng)能力得到了明顯的抑制(p<0.01),

3、PGPIPN濃度為10μg·ml-1時(shí),細(xì)胞株SKOV3的24h抑制率為56.24%;平板法的克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果較明顯,與空白對(duì)照組相比1μg·ml-1和10μg·ml-1的PGPIPN抑制率分別為32.50%和38.11%;MTT實(shí)驗(yàn)中,PGPIPN濃度為10μg·ml-1時(shí),細(xì)胞株SKOV3的72h抑制率為32.36%,而LO2和MEFS的抑制率較低,均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),與此同時(shí),順鉑對(duì)其三種細(xì)胞均有較強(qiáng)的抑制作用(p<0

4、.01)。PCR實(shí)驗(yàn)中顯示,PGPIPN可以顯著降低細(xì)胞株SKOV3的MTA1基因的表達(dá)(p<0.01),當(dāng)濃度為10μg·ml-1時(shí),MTA1基因的mRNA降低率最大,為23.11%,同樣,在卵巢癌原代細(xì)胞中有相似的結(jié)果,濃度為10μg·ml-1時(shí)的降低率為25.72%;PGPIPN可以顯著增強(qiáng)細(xì)胞株SKOV3的NM23H1基因的表達(dá)(p<0.01),當(dāng)濃度為10μg·ml-1時(shí),NM23H1基因的mRNA增長(zhǎng)率最大,為24.89%,

5、同樣,在卵巢癌原代細(xì)胞中有相似的結(jié)果,濃度為10μg·ml-1時(shí)的增長(zhǎng)率為25.91%。westernblot試驗(yàn)中顯示,PGPIPN可以顯著降低MTA1蛋白的表達(dá)(p<0.01),當(dāng)濃度為10μg·ml-1時(shí),降低率最大,細(xì)胞株SKOV3為22.39%,原代細(xì)胞為24.08%。
　　結(jié)論:1、PGPIPN能夠抑制人卵巢癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,對(duì)正常細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性作用;2、PGPIPN通過(guò)下調(diào)MTA1與上調(diào)NM23H1基因的mRNA和