1、目的：肝纖維化(hepatic fibrosis，HF)是許多慢性肝病共有的病理過程，肝細胞發(fā)生壞死和炎癥刺激時，細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的增生與降解失去平衡，從而導致肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常沉積。目前認為肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)激活是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)。血紅素氧合酶(heme oxygenase，HO)是紅素代謝途徑中的限速酶，HO-1是HO的一種同工

2、酶，作為體內(nèi)的一種保護蛋白，HO-1及其催化產(chǎn)物膽綠素、膽紅素和CO在體內(nèi)均有顯著的抗炎、抗細胞增殖及調(diào)節(jié)細胞因子表達等重要作用。近年來的研究顯示，在肝移植、急性肝損傷和缺血再灌注損傷等多種肝臟疾病中，HO-1對肝細胞均具有保護作用，但對于HO-1與肝纖維化的相關(guān)研究甚少。本實驗目的通過建立免疫性肝纖維化動物模型，應用HO-1的誘導劑鈷原卟啉(cobalt protoporphyrin，CoPP)增加HO-1蛋白的表達，來探討HO-1對

3、肝纖維化發(fā)生發(fā)展的影響，進一步揭示HO．1的作用機理，為臨床有效地預防和治療肝纖維化提供實驗及理論依據(jù)。 方法：取健康雄性SD大鼠52只，隨機分成三組：正常對照組12只(N組)、肝纖維化組20只(F組)和鈷原卟啉組20只(Co組)。F組應用人血清白蛋白建立免疫性肝纖維化模型。Co組模型制備同F(xiàn)組，在尾靜脈攻擊同時給予CoPP腹腔注射。N組給予相應量的生理鹽水注射。攻擊后6周將所有大鼠處死，取血、取肝。通過Western blot

4、方法、免疫組織化學方法觀察HO-1蛋白表達；采用全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)水平反映肝功能；采用丫放射免疫計數(shù)器檢測血清透明質(zhì)酸酶(hyaluronic acid，HA)、層粘蛋白(1aminin，LN)、Ⅲ型前膠原肽(typeⅢprecollagen，PCⅢ)、Ⅳ型膠原(type

5、IⅣ collagen，Ⅳ-C)的水平反映肝纖維化程度；HE染色觀察肝纖維組織增生與分布情況，觀察成纖維細胞增勝程度，并觀察肝細胞和炎細胞的變化；VG染色觀察Ⅰ型膠原增生程度；Foot網(wǎng)染觀察Ⅲ型膠原增生程度；鏡下觀察除匯管區(qū)、纖維間隔以外肝細胞間梭形細胞的數(shù)目。 結(jié)果： 1．Western blot方法顯示F組大鼠肝組織HO-1蛋白含量較N組增加(P<0.01)，Co組較F組增加(P<0.05)。免疫組織化學方法顯示F

6、組較N組HO-1染色強度增加，范圍擴大，而Co組呈現(xiàn)出均勻一致的強染色。 2．血清學肝纖維化指標顯示與N組比較，F(xiàn)組肝纖維化指標HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C均明顯升高，有顯著性差異(P<0.01)。與F組比較，Co組肝纖維化指標HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C明顯降低(P<0.05)。通過HE染色、VG染色、Foot網(wǎng)染結(jié)果顯示CoPP的給予可以使肝纖維化程度減輕。 3．血清學ALT、AST結(jié)果顯示給予CoPP腹腔注射后大鼠血清ALT、

7、AST升高水平較F組下降(P<0.01)。HE染色結(jié)果顯示C0組肝細胞損傷程度減輕(P<0.01)。 4．通過鏡下對除匯管區(qū)、纖維間隔以外肝細胞間梭形細胞數(shù)目的比較顯示Co組可使增多的細胞數(shù)減少(P<0.05)。 5．通過對匯管區(qū)及中央靜脈炎性細胞的觀察，Co組僅見少量炎性細胞。 結(jié)論： 1．免疫性肝纖維化大鼠肝組織HO-1蛋白表達增加，CoPP可誘導HO-1進一步增多，抑制了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。