1、目的：考察具有陽(yáng)離子型和溫度敏感性的泊洛沙姆殼聚糖接枝物納米膠束的理化性質(zhì),并探討影響模型抗原的巨噬細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞攝取的因素,以便為新型疫苗載體的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：本研究利用1-乙基-3-(3-二甲基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-掘基-丁二酰亞胺(NHS)介導(dǎo)反應(yīng),合成泊洛沙姆-殼聚糖接枝物,通過(guò)核磁共振圖譜(1H-NMR)和紅外光譜圖(FT-IR)驗(yàn)證中間體及產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。采用芘熒光探針?lè)ê涂梢?jiàn)分光光度法測(cè)定了

2、接枝物的臨界膠束濃度(CMC)和最低臨界溶液溫度(LCST)。采用直接分散法制備含OVA的聚合物納米膠束,BCA法測(cè)定納米膠束的載藥量和包封率,并以粒徑、載藥量和包封率作為指標(biāo)篩選工藝與處方。探討納米膠束在37℃和4℃條件下的體外釋放行為,并通過(guò)MTT法考察泊洛沙姆殼聚糖接枝物的細(xì)胞毒性。體外誘導(dǎo)小鼠骨髓中單個(gè)核細(xì)胞使其分化形成樹突狀細(xì)胞,通過(guò)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取情況。
　　 結(jié)果：紅外光

3、譜圖和核磁共振分析結(jié)果確證了中間體及泊洛沙姆殼聚糖接枝物的合成,熱分析結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了泊洛沙姆殼聚糖接枝物的形成。當(dāng)Poloxamer與CS投藥質(zhì)量之比為0.63:0.025時(shí),所制得的聚合物CMC值為(3.24±0.06)x10-6m01`L-1,LCST在37℃附近。在優(yōu)選的納米膠束制備工藝與處方條件下,所制得載藥納米膠束粒徑為(219.1±2.3)nm,OVA的包封率和載藥量分別為(42.2±5.6)％和(21.4±2.3)％,且

4、重現(xiàn)性良好。載藥納米膠束的Zeta-電位為(11.67±2.25)mV。負(fù)載OVA的膠束在37℃條件下的4h累積釋放為30％,但在4℃條件下4 h即可達(dá)到釋放完全。MTT結(jié)果表明,聚合物膠束的細(xì)胞毒性低。熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀的結(jié)果顯示,巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞對(duì)FITC-OVA納米膠束的攝取率明顯高于溶液態(tài)FITC-OVA。
　　 結(jié)論：泊洛沙姆接枝殼聚糖形成的納米膠束具有溫度敏感性和陽(yáng)離子特征,且細(xì)胞毒性低,可顯著提高所負(fù)載模型