1、目的:研究外周型苯二氮卓受體(PBR)對(duì)新生兒窒息后血清導(dǎo)致人近曲腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　 方法:(1)以HK-2細(xì)胞(Humanrenal.proximaltubularcells)為研究對(duì)象。(2)以新生兒重度窒息(Apgar評(píng)分小于4分)后第一天血清(20％體積分?jǐn)?shù))作為攻擊因素。(3)本實(shí)驗(yàn)按雙盲、隨機(jī)、對(duì)照處理原則分為四組,即正常對(duì)照組(C組)、窒息對(duì)照組(AC組)、窒息后激動(dòng)劑組(AR組

2、)、窒息后拮抗劑組(AP組)。(4)檢測(cè)指標(biāo):在倒置相差顯微鏡下觀察HK-2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變及生長情況,外周型苯二氮卓受體被特異性激動(dòng)劑(Ro5—4864)激動(dòng)后或被特異性拮抗劑(PK11195)阻斷后,用免疫組化檢測(cè)HK-2細(xì)胞內(nèi)caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)情況。(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±S)表示,各實(shí)驗(yàn)組間進(jìn)行單因素方差分析,組間進(jìn)行LSD檢驗(yàn)。P<0.05為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用SPS

3、S10.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。
　　 結(jié)果:(1)倒置相差顯微鏡下觀察HK-2細(xì)胞生長狀況:正常對(duì)照組細(xì)胞貼壁良好,透明度大,折光性強(qiáng),呈扁平的多角形,分裂相多,細(xì)胞排列緊密,連接成片,數(shù)量多。窒息對(duì)照組細(xì)胞生長緩慢,細(xì)胞數(shù)量比正常對(duì)照組明顯減少,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,由典型的扁平多角形細(xì)胞變?yōu)椴灰?guī)則圓形或橢圓形,折光性減弱,輪廓增強(qiáng),胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡,脂滴,顆粒樣物質(zhì),細(xì)胞間空隙加大,連接松散,細(xì)胞間可見較多細(xì)胞碎片。窒息后激動(dòng)劑組細(xì)胞

4、損傷得到明顯改善,細(xì)胞貼壁良好,細(xì)胞間連接尚可,但未恢復(fù)至窒息對(duì)照組或正常對(duì)照組。而窒息后拮抗劑組細(xì)胞損傷較窒息對(duì)照組更重,細(xì)胞生長緩慢,細(xì)胞數(shù)量少,細(xì)胞間連接更松散,可見更多細(xì)胞碎片。(2)Caspase-9及Bax的表達(dá)。與正常對(duì)照組(分別為32.11±5.12,23.55±3.86)相比,窒息對(duì)照組Caspase-9(63.58+3.80)、Bax(53.23±2.89)表達(dá)明顯增加。而與窒息對(duì)照組相比,窒息后激動(dòng)劑組Caspas

5、e-9(48.59±5.91)、Bax(41.52±3.65)表達(dá)明顯減少；但窒息后拮抗劑組Caspase-9(75.34±4.83)、Bax(60.28±2.97)表達(dá)明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)Bcl-2的表達(dá)。與正常對(duì)照組(70.36±6.02)相比,窒息對(duì)照組(46.29+4.98)表達(dá)明顯減少；而與窒息對(duì)照組相比,窒息后激動(dòng)劑組(60.45±5.26)表達(dá)明顯增加；但窒息后拮抗劑組(28.37±4.05