1、第一部分 四氮鹽(XTT)減低法定量分析氨溴索對(duì)白假絲酵母菌生物膜形成過(guò)程的干預(yù)作用
　　目的：用四氮鹽（XTT）減低法定量分析氨溴索對(duì)體外白假絲酵母菌(Candidaalbicans,C.albicans)生物膜(biofilm,BF)形成過(guò)程的抑制作用。
　　方法：用微孔板法建立體外不同時(shí)間段的白假絲酵母菌ATCC10231BF模型；采用甲基四氮鹽（theabatedtetrazoliumsalt,XTT）減低法定量評(píng)價(jià)

2、氨溴索對(duì)不同時(shí)間段的白假絲酵母菌BF的抑制作用；銀染后，倒置顯微鏡下觀察該藥對(duì)白假絲酵母菌成熟BF的形態(tài)學(xué)影響。
　　結(jié)果：在96孔微量細(xì)胞培養(yǎng)板上成功建立白假絲酵母菌90min、24h、48hBF模型。0（空白對(duì)照組）、0.25mg/ml、1.5mg/ml的氨溴索干預(yù)90min的白假絲酵母菌BF，作用8h后，XTT減低法測(cè)OD450的值分別為2.18±0.10、1.91±0.14、0.59±0.11；相同濃度的氨溴索干預(yù)24h的

3、BF后，OD450的值分別為3.16±0.15、2.83±0.11、1.08±0.15；相同濃度的氨溴索干預(yù)48h的BF后，OD450的值分別為3.23±0.10、2.92±0.11、1.21±0.12；相同時(shí)間段的BF，組間比較有顯著性差異（P＜0.05）。利用銀染法可觀察到氨溴索干預(yù)白假絲酵母菌成熟BF后，呈密集針織樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的BF其結(jié)構(gòu)變得疏松，部分網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)斷裂，且1.5mg/ml的氨溴索較0.25mg/ml的氨溴索干預(yù)效果更明顯

4、。
　　結(jié)論：氨溴索對(duì)體外不同時(shí)間段的白假絲酵母菌BF均有抑制作用，且在一定藥物濃度范圍內(nèi)隨著該藥藥物濃度的增加，對(duì)BF的抑制作用顯著增強(qiáng)。銀染法可以定性觀察氨溴索對(duì)白假絲酵母菌成熟BF的影響。
　　第二部分 氨溴索對(duì)白假絲酵母菌生物膜形成過(guò)程的影響及結(jié)構(gòu)定量化分析
　　目的：利用激光共聚焦顯微鏡（ConfocalLaserScanningMicroscopy，CLSM）觀察氨溴索對(duì)白假絲酵母菌ATCC10231菌株B

5、F形成過(guò)程的影響，并用圖像結(jié)構(gòu)分析軟件（ImageStructureAnalyzer,ISA）對(duì)BF結(jié)構(gòu)參數(shù)進(jìn)行定量分析。采用ImageProPlus6.0分析軟件分析氨溴索對(duì)BF內(nèi)白假絲酵母菌死亡率的影響。
　　方法：置片法培養(yǎng)90min、24h和48h的白假絲酵母菌ATCC10231菌株BF模型，分別將其分為3組，為空白對(duì)照組、氨溴索0.25mg/ml組、氨溴索1.5mg/ml組，藥物作用8小時(shí)。在空白對(duì)照組中，用FITC-C

6、onA染色后在熒光顯微鏡下觀察BF的動(dòng)態(tài)形成過(guò)程。通過(guò)熒光探針SYTO9/PI標(biāo)記，利用CLSM動(dòng)態(tài)觀察氨溴索干預(yù)后，對(duì)BF形成過(guò)程的影響，并應(yīng)用ISA軟件對(duì)BF結(jié)構(gòu)參數(shù)進(jìn)行定量分析。采用ImageProPlus6.0軟件分析氨溴索干預(yù)后，BF內(nèi)白假絲酵母菌的死亡率。
　　結(jié)果：在空白對(duì)照組，運(yùn)用熒光顯微鏡可觀察到生長(zhǎng)在玻片上呈綠色點(diǎn)片狀的BF，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)綠色熒光增多增強(qiáng)，逐漸形成針織網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。ISA軟件定量分析顯示：在空

7、白對(duì)照組中，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，BF逐漸變厚，平均擴(kuò)散距離（AverageDiffusionDistance,ADD）和結(jié)構(gòu)熵（TextualEntropy,TE）呈增加的趨勢(shì)，區(qū)域孔率（ArealPorosity,AP）呈下降趨勢(shì)。分別用0.25mg/ml和1.5mg/ml氨溴索干預(yù)90minBF、24hBF和48hBF，作用8h后與空白對(duì)照組相比，BF厚度、ADD和TE均減少（P＜0.05），AP增加（P＜0.05）。IPP軟件分析

8、顯示：分別用0.25mg/ml和1.5mg/ml氨溴索干預(yù)90minBF、24hBF和48hBF，作用8h后與空白對(duì)照組相比，BF內(nèi)白假絲酵母菌死亡率增加（P＜0.05）；高濃度組（1.5mg/ml）與低濃度組（0.25mg/ml）相比，高濃度組BF內(nèi)白假絲酵母菌死亡率增加更明顯（P＜0.05）。
　　結(jié)論：ISA軟件可以對(duì)氨溴索對(duì)白假絲酵母菌ATCC10231菌株BF的形成過(guò)程進(jìn)行定量分析。氨溴索干預(yù)各個(gè)時(shí)間段白色念株菌BF后，