1、近年來的研究發(fā)現(xiàn)大多數2型糖尿病患者在發(fā)病初期已出現(xiàn)胰島素的早期相分泌缺陷，反映其島β細胞功能已出現(xiàn)障礙，若及時治療則能夠部分或完全地恢復其胰島功能。另有研究者發(fā)現(xiàn)胰島素具有自分泌作用，且胰島β細胞本身也可發(fā)生胰島素抵抗，但具體機制尚不清楚。因此，本研究旨在觀察胰島素對胰島細胞的作用，結合基因和蛋白質表達分析，討論其中可能的機制，并探索促進胰島細胞生存和恢復正常功能的途徑。 本研究觀察了胰島素對大鼠原代胰島細胞(擁有完整的胰島結

2、構)和小鼠MIN6胰島β細胞株(單一的細胞類型)的作用，進而在培養(yǎng)環(huán)境中添加胰島素抗體，以中和胰島素的效應，并進一步采用熒光實時定量PCR和Western蛋白印跡方法，從基因和蛋白表達層面分析了胰島素對胰島細胞的作用機制。結果發(fā)現(xiàn)，外源性胰島素(0.1nmol/L和100nmol/L)對大鼠原代胰島細胞和小鼠MIN6胰島β細胞株的葡萄糖刺激的胰島素分泌(GSIS)功能沒有明顯影響，與單純高濃度葡萄糖培養(yǎng)無差異(P＞0.05)；添加胰島素

3、抗體(0.125～2μg/ml)后，則表現(xiàn)胰島素分泌量降低(測定C肽，P＜0.05)，隨著培養(yǎng)和干預時間的延長，胰島素分泌量也隨之下降(P＜0.05)，呈現(xiàn)劑量-效應、時間-效應關系，而加入相同濃度的無關抗體后，胰島素的分泌量與對照組沒有差異(P＞0.05)。形態(tài)學觀察也發(fā)現(xiàn)，經胰島素抗體干預的胰島細胞，較早出現(xiàn)胰島結構的破壞和胰島細胞的死亡，因體外培養(yǎng)的環(huán)境中并不存在體液免疫和細胞免疫的完整體系，也排除了抗體免疫球蛋白的非特異作用，推

4、測其影響可能由胰島素抗體中和了環(huán)境中的胰島素所致。通過噻唑藍(MTT)的細胞活力分析也發(fā)現(xiàn)，小鼠MIN6胰島β細胞株在胰島素抗體干預后，活力較快下降。作為對照的相同濃度無關抗體對大鼠原代胰島或小鼠MIN6胰島β細胞株均無類似效應。基因和蛋白質表達研究顯示，胰島素或胰島素抗體對于胰島細胞的胰島素及其調控因子PDX-1的表達影響均不顯著，胰島素使Bcl-2的表達略有升高，而胰島素抗體則下調Bcl-2的表達，并上調Bad和Bax的表達。提示胰