1、目的：目前關(guān)于糖尿病(DM)患者新生血管形成缺陷是否與血管生長(zhǎng)因子的表達(dá)下調(diào)有關(guān)尚存在爭(zhēng)議。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)由于其確切的降壓療效和靶器官保護(hù)作用在臨床中應(yīng)用廣泛。但關(guān)于該類藥物在肢體缺血性血管再生中究竟發(fā)揮促進(jìn)還是抑制作用及其下游信號(hào)通路目前尚無(wú)定論。本課題的目的在于探討DM大鼠肢體缺血性血管再生受損的原因以及ACEI-培哚普利在缺血后血管再生中的作用及相關(guān)分子通路。為盡快闡明ACEI在血管性疾病中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基

2、礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法：以雄性Wistar大鼠為研究對(duì)象，STZ誘導(dǎo)1型糖尿病(T1DM)模型。單側(cè)股動(dòng)脈結(jié)扎誘導(dǎo)后肢缺血。將DM大鼠分為非處理組、培哚普利治療組、培哚普利+NOS阻斷劑治療組：ACEI+BK-B1R拮抗劑治療組。將正常大鼠分為非處理組和培哚普利治療組。術(shù)后第2天分別給予上述治療。在治療1周和4周時(shí)分批處死動(dòng)物。通過(guò)HE染色和免疫組化染色法定量測(cè)定后肢肌肉的MVD。RT-PCR和Western免疫印跡法分析后肢肌肉

3、中eNOS、VEGF、bFGF的mRNA和蛋白表達(dá)水平。分別用NO和NOS測(cè)試盒測(cè)定肌肉中NO含量和eNOS活性。所有數(shù)據(jù)均以x±s表示。采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析進(jìn)行相應(yīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果： 1.一般情況比較：與正常對(duì)照(Con)組大鼠相比，DM大鼠的體重低于對(duì)照組，而血糖高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。各個(gè)治療組間血壓差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.血管再生

4、分析：治療1周和4周時(shí)，Con組和DM組非缺血側(cè)肌肉MVD均相似。在缺血側(cè)，DM組比Con組的MVD分別降低23％和27％。培哚普利對(duì)正常和DM大鼠非缺血側(cè)肌肉MVD均無(wú)影響；但使缺血側(cè)肌肉MVD明顯增加，這種促血管再生作用在DM組的表現(xiàn)更為顯著。聯(lián)合NOS阻斷劑和BK-B1R拮抗劑治療使缺血側(cè)MVD較單藥治療組明顯下降。在一周時(shí)分別下降47％和49％；4周時(shí)分別下降45％和45％。 3.分子機(jī)制：與Con組相比，DM大鼠缺血肢

5、體的eNOS、VEGF和bFGF的mRNA和蛋白表達(dá)、NO含量及cNOS活性均明顯下降。培哚普利治療1周和4周后正常和DM大鼠上述指標(biāo)均有不同程度提高，并在DM組的表現(xiàn)更為明顯。聯(lián)合BK-B1R拮抗劑使缺血側(cè)eNOS、VEGF和bFGF的表達(dá)、NO含量及cNOS活性下降；聯(lián)合NOS阻斷劑使缺血側(cè)eNOS和bFGF的表達(dá)、NO含量及cNOS活性下調(diào)，但不影響VEGF的表達(dá)。提示培哚普利的促血管新生作用部分由BK-B1R介導(dǎo)，其下游信號(hào)分子

6、包括eNOS、VEGF和bFGF。其中VEGF位于eNOS的上游，而bFGF位于eNOS的下游。 4.相關(guān)分析：缺血組織的MVD與eNOS、VEGF和bFGF的mRNA和蛋白表達(dá)、NO含量及cNOS活性均呈正相關(guān)。 結(jié)論：DM狀態(tài)下大鼠缺血肢體的血管再生和相關(guān)生長(zhǎng)因子的表達(dá)及活性受損。培哚普利對(duì)正常和DM大鼠肢體缺血性血管再生均具有促進(jìn)作用，這種影響在DM組的表現(xiàn)更為顯著。并與eNOS、VEGF、bFGF的表達(dá)上調(diào)、NO