1、山莊降脂片是由承德新愛民制藥有限公司生產(chǎn)的中成藥，其主要成分有決明子，山楂，荷葉。具有清熱活血，降濁通便的功效，用于痰濁瘀滯所致的高血壓、高血脂癥、預(yù)防動脈粥樣硬化。藥品質(zhì)量的可控性是藥品的基本屬性之一，是藥品的安全性和有效性的基礎(chǔ)。質(zhì)量標準是監(jiān)控藥品質(zhì)量的重要手段，是質(zhì)量可控性的具體體現(xiàn)。為了確保山莊降脂片的質(zhì)量，本文對該藥的質(zhì)量標準進行了研究。
　　 本研究采用反相高效液相色譜法和紫外分光光度法建立了處方中主要指標成分的分析

2、方法。建立了不同生產(chǎn)批次山莊降脂片的HPLC指紋圖譜，并對山莊降脂片中主要色譜特征峰進行了分析，確定了主要色譜特征峰在山莊降脂片組成藥材中的歸屬，為闡明中藥復(fù)方制劑的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了有效的分析方法。方法專屬性強，靈敏快速、結(jié)果準確可靠，精密度和穩(wěn)定性良好。本研究對山莊降脂片進行了綜合的質(zhì)量控制與評價，為保證中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量提供了良好的質(zhì)量控制與評價方法。
　　 第一部分山莊降脂片的質(zhì)量標準研究
　　 目的：利用薄層色

3、譜法對山莊降脂片處方中決明子、荷葉及所含的總黃酮類成分槲皮素進行定性鑒別；建立反相高效液相法測定制劑中橙黃決明素、大黃素、大黃酚和荷葉堿含量的方法，同時建立紫外分光光度法測定制劑中總黃酮含量的方法。
　　 方法：
　　 1.定性鑒別：（1）橙黃決明素、大黃素和大黃酚的鑒別：使用硅膠G薄層板，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸（15：5：1）為展開劑，365 nm紫外燈下檢視。（2）槲皮素的鑒別：使用硅膠G板，以正己烷-乙酸乙酯-甲

4、酸（15：12：1）為展開劑，噴以1％三氯化鋁溶液，365 nm紫外燈下檢視。（3）荷葉堿的鑒別：使用硅膠GF254板，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（4：4：2：1）下層液為展開劑，置紫外燈（254 nm）下檢視。
　　 2.含量測定：（1）高效液相色譜法：選用合適的色譜柱，調(diào)整流動相的組成、配比、流速以及柱溫，在選定的波長下測定，使指標峰達到分離完全、理論塔板數(shù)符合測定要求；紫外分光光度法：選擇合適的顯色方法和測定波長，使其符合

5、測定要求。（2）高效液相色譜法線性范圍考察：配制系列濃度的對照品溶液，以色譜峰峰面積為縱坐標，以進樣濃度為橫坐標進行線性回歸，得回歸曲線并考察線性范圍。紫外分光光度法線性范圍考察：以吸收度為縱坐標，以測定液濃度為橫坐標進行線性回歸，得回歸曲線并考察線性范圍。（3）方法學(xué)考察：分別考察測定方法的精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和加樣回收率。（4）樣品含量測定：用選定的高效液相色譜法和紫外分光光度法測定5批山莊降脂片中指標成分的含量。
　　

6、結(jié)果：
　　 1.鑒別方法的研究：采用相應(yīng)的薄層鑒別方法，橙黃決明素、大黃素、大黃酚、槲皮素、荷葉堿薄層展開后，供試品溶液與相應(yīng)的對照品及對照藥材溶液在相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，而陰性對照無干擾。
　　 2.含量測定：（1）橙黃決明素、大黃素和大黃酚的最佳色譜條件：采用以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的固定相，甲醇（B相）-0.1％磷酸水（D相）溶液梯度洗脫，0～5 min B相65～70％；5～25 min B相70～85％

7、；流速1.0 ml·min-1，柱溫：35℃；檢測波長為286nm，進樣量為20μl。且在上述色譜條件下，橙黃決明素、大黃素和大黃酚峰形良好，無其它峰干擾，以橙黃決明素、大黃素和大黃酚計，理論塔板數(shù)均大于5000，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。分別在0.946～11.3 mg·L-1，、0.137～1.65mg·L-1和0.153～1.83 mg·L-1范圍內(nèi)與其峰面積有良好的線性關(guān)系，回歸方程分別為：y=221.9 x-32.05

8、（r=0.9999，n=7）；y=123.4x+9.979（r=0.9998，n=7）；y=67.16x+2.650（r=0.9998，n=7）；該方法精密度分別為0.38％、0.84％、2.7％，重現(xiàn)性RSD分別為0.14％、0.65％、1.2％，供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為0.76％、0.63％、0.73％。平均回收率分別為99.5％、99.6％、98.9％， RSD分別為0.61％、0.13％、0.18％。5批樣品中橙

9、黃決明素含量不低于50.6μg·g-1，大黃素含量不低于7.20μg·g-1，大黃酚含量不低于7.65μg·g-1。（2）高效液相色譜法測定山莊降脂片中荷葉堿的含量：色譜條件：KromasilC18（150mm×4.6 mm，5μm）色譜柱；流動相：乙腈-水-三乙胺（45：55：0.5），冰醋酸調(diào)pH=6；流速：1.0ml·min-1；柱溫：室溫；檢測波長：270 nm；進樣量：20μl?；貧w方程為：y=1.04×105x-5.30×1

10、04（r=0.9999），荷葉堿在11.0～44.0μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。方法學(xué)考察表明，該方法精密度和重現(xiàn)性的RSD分別為0.61％、1.3％，供試品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.06％。平均回收率為98.4％，RSD為0.25％。5批樣品中荷葉堿含量不低于19.5μg·g-1。（3）山莊降脂片中總黃酮的含量測定：選擇375 nm作為測定波長，回歸方程為：A=8.22×10-2C+3.34×10-3，r=0.9992，槲

11、皮素在2.79～8.72 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。方法學(xué)考察表明，該方法精密度和重現(xiàn)性的RSD分別為0.14％、1.3％，供試品在1小時內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.73％。平均回收率為96.1％， RSD為0.085％。5批樣品中以槲皮素計總黃酮含量不低于0.653mg·g-1。
　　 結(jié)論：本文首次建立了薄層色譜法檢測山莊降脂片中決明子、荷葉及總黃酮類成分，該法所得斑點清晰圓整，特異性強，重復(fù)性好，可用于山莊降脂片中決明子、荷

12、葉及總黃酮類成分的薄層鑒別。本文首次建立了RP-HPLC同時測定山莊降脂片中君藥決明子中橙黃決明素、大黃素及大黃酚的含量，并且可準確測定荷葉堿的含量，方法簡便快速、結(jié)果準確、專屬性強、精密度和準確度良好。用紫外分光光度法測定山莊降脂片中總黃酮類成分含量，快速簡單。
　　 第二部分山莊降脂片指紋圖譜研究
　　 目的：建立山莊降脂片的HPLC指紋圖譜，得到對照圖譜，并與不同批號樣品指紋特征相比較，計算相似度，為科學(xué)評價與有效

13、控制山莊降脂片質(zhì)量提供新方法。
　　 方法：（1）提?。罕容^了不同提取溶劑，不同提取方法及不同提取時間的提取效果，選擇提取成分較多，提取率較高的提取條件。（2）色譜條件的優(yōu)化：選用合適的色譜柱及檢測波長，調(diào)整流動相的組成、配比、流速，調(diào)節(jié)柱溫，使色譜圖符合指紋圖譜研究的要求。（3）系統(tǒng)適用性試驗：在已確定的色譜條件下，考察指紋圖譜中橙黃決明素的分離度和理論塔板數(shù)。（4）精密度試驗：取同一份樣品溶液，重復(fù)進樣6次，記錄保留時間和峰

14、面積。（5）穩(wěn)定性試驗：取同一樣品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h進樣，記錄保留時間和峰面積。（6）重現(xiàn)性試驗：取同一批山莊降脂片粉末6份，平行制備各樣品溶液，分別進樣，記錄保留時間和峰面積。（7）指紋圖譜的建立：分別取山莊降脂片10批，制備供試品溶液，進行指紋圖譜分析和相似度評價。
　　 結(jié)果：（1）提?。哼x用氯仿加2.5 mol·L-1硫酸超聲提取60min為佳，所得色譜峰數(shù)量最多，強度大。（2）色譜條件：采用Di

15、amonsilTM C18（150mm×4.6 mm，5μm）色譜柱；流動相甲醇（B相）——0.1％磷酸（D相）梯度洗脫；0～20 min，B相6～45％；20～35 min，B相45～65％；35～55 min，B相65～90％；流速為1.0 ml·min-1；檢測波長254 nm；柱溫30℃；進樣量為20μl。（3）系統(tǒng)適用性試驗：在此色譜條件下，以橙黃決明素色譜峰計算理論塔板數(shù)約為5000，與其他色譜峰的分離度大于1.5。（4）精

16、密度試驗：以橙黃決明素為內(nèi)參照峰，計算各主要色譜峰的相對保留時間及峰面積占總峰面積5％以上峰的峰面積，其RSD分別為0.012％～0.11％和1.4％～2.7％，符合指紋圖譜要求，精密度良好。（5）穩(wěn)定性試驗：各主要色譜峰的相對保留時間及峰面積占總峰面積5％以上峰的峰面積，其RSD分別為0.14％～2.1％和1.4％～2.7％，符合指紋圖譜要求，說明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。（6）重復(fù)性試驗：各主要色譜峰的相對保留時間及峰面積占總峰面積5

17、％以上峰的峰面積，其RSD分別為0.099％～1.9％和0.8％～2.7％，符合指紋圖譜要求，重現(xiàn)性良好。（7）指紋圖譜的建立：得到10批山莊降脂片的指紋圖譜及其17個共有色譜峰，相似度評價結(jié)果能有效反映不同批次山莊降脂片的質(zhì)量。
　　 結(jié)論：本文首次建立了山莊降脂片的指紋圖譜，得到其對照圖譜，利用相似度對不同批次樣品的差異進行了研究。確定了樣品的最佳提取條件，對不同流動相組成、配比及其流速、檢測波長、梯度比例等進行了考察，優(yōu)化