1、目的：(1)觀察人肺腺癌細胞株A549與人肺腺癌耐DDP細胞株A549/DDP的放射生物學特性，探討肺腺癌耐DDP細胞株的耐藥性對其放射敏感性的影響。(2)建立A549與A549/DDP兩組細胞株的雙向凝膠電泳圖譜，識別并鑒定其差異表達的蛋白質，篩選肺腺癌耐藥、耐輻射相關蛋白質。
　　 方法：(1)使用6MV-X射線對A549和549/DDP進行照射，采用克隆形成實驗擬合細胞存活曲線，根據D0、Dq、N及SF2值等放射生物學參數

2、，比較2株腫瘤細胞的放射敏感性。流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期，檢測腫瘤細胞的凋亡率，分析2株腫瘤細胞的細胞周期分布、凋亡率與放射敏感性之間的關系。(2)收集A549與A549/DDP總蛋白質，應用二維凝膠電泳(2-DE)分離2組總蛋白質，采用PDquest7.1軟件進行匹配和差異分析，識別兩組之間表達差異蛋白點。從膠中切取差異蛋白點進行膠內原位酶解、酶解產物進行MALDI-TOF-MS分析，獲取肽質量指紋圖，數據庫搜索鑒定蛋白質。使

3、用Western免疫印跡對其中3個蛋白質進行驗證，免疫組化技術對上述3個差異蛋白質在肺腺癌的化療耐藥組及化療敏感組的差異表達水平進行驗證。
　　 結果：(1)2株腫瘤細胞D0、Dq、N及SF2值大小為A549A549/DDP。流式細胞儀檢測到6Gy照射后2組細胞出現G2/M期阻滯，且A549較A549/DDP阻滯明顯，照射后24小時、48小時、72小時A549及A549/DDP2組細胞有

4、顯著性差異(p<0.05)。流式細胞儀檢測到明顯的凋亡峰、腫瘤細胞凋亡率，并且2種腫瘤細胞株凋亡峰值依次為A549>A549/DDP，與其放射敏感性高低一致。(2)成功地進行了肺腺癌細胞株A549與A549/DDP蛋白質的分離，建立了分辨率較高、重復性較好的A549與A549/DDP細胞蛋白質的2-DE圖譜，識別了45個差異表達的蛋白質點，鑒定了27個差異表達蛋白質，這些蛋白質按功能主要可以分為六類：①基本代謝相關的酶類：如ATP sy

5、nthase subunit beta,mitochondrial、Egl nine homolog1、Delta(3，5)-Delta(2，4)-dienoyl-COA isomerase，mitochondrial、Triosephosphate isomerase、Proteasome subunit alphatype-6、Cytochrome b5 type B、Fatty acid-binding protein，epide

6、rmal、Hemoglobin subunit beta等；②信號傳導相關蛋白：如Cofilin—1、Keratin，typeⅠ cytoskeletal18、Keratin，typeⅢ cytoskeletal1等；③與解毒和轉錄翻譯相關蛋白：如Peroxiredoxin-4、Elongation factor1-delta、Membrane—associated progesterone receptor component2、Pu

7、tative
　　 RNA—binding protein3、Probable ATP-dependent RNA helicase DDX6等；④分子伴侶：如Heat shock protein beta-1、10 KDa heat shock protein，mitochondrial等；⑤細胞結構相關蛋白質：如Vimentin、Tubulin betachain、Tubulin beta-2A chain、PDZ and

8、LIM domain protein1、Myosinregulatory light chain MRLC2、Histidine triad nucleotide—binding protein1、Histone H2B type1-C/E/F/G/I等；⑥鈣結合蛋白：Annexin A2、Annexin A4。Western免疫印跡分析證實了差異蛋白質：Heat shockprotein beta-1、Annexin A4、Vimen