1、目的： 脆弱類桿菌(Bacteria~ragilis,Bf)是一種革蘭氏陰性無芽孢厭氧桿菌，為臨床上重要的條件致病菌，可引起多種感染性疾病。脆弱類桿菌也是人體腸道正常菌群的優(yōu)勢菌，在維持腸道微生態(tài)平衡中起著重要的作用。傳統(tǒng)的脆弱類桿菌定性定量檢測法主要是通過厭氧培養(yǎng)后進行生化鑒定和平板計數(shù)，這種方法不但費時費力，而且時常會引起鑒定、計數(shù)失誤。近年來，國內(nèi)外出現(xiàn)了以16SrRNA為靶設(shè)計引物，通過熒光定量PCR檢測細菌的報道。此法

2、具有靈敏度高、特異性強、定量準確等優(yōu)點。本試驗對熒光定量PCR在脆弱類桿菌檢測中的應(yīng)用做初步的研究。 方法： 以脆弱類桿菌標準菌株ATCC2528516SrRNA基因序列為靶，設(shè)計脆弱類桿菌種特異性引物，分別以脆弱類桿菌ATCC25285基因組DNA和目標基因為標準品，與已知DNA含量的12株脆弱類桿菌、3株脆弱類桿菌未定株(僅有1項生化反應(yīng)與脆弱類桿菌不同)和其它7種細菌一起進行熒光定量PCR擴增，對脆弱類桿菌進行鑒定

3、，并與生化鑒定法作比較。利用標準曲線定量脆弱類桿菌DNA的含量，并與實際DNA量做比較，研究熒光定量PCR定量的準確性；對已知含量的脆弱類桿菌DNA進行10倍等比稀釋，檢測熒光定量PCR的靈敏度。 結(jié)果： 1．熒光定量PCR不但能夠?qū)?2株脆弱類桿菌鑒定出來，而且還可以把3株生化反應(yīng)不能夠確定的脆弱類桿菌檢測出來。 2·兩種方法制備的標準曲線，其閾值循環(huán)數(shù)與模板濃度的對數(shù)值之間均具有良好的線性關(guān)系。兩種標準曲線對