1、背景：
　　腺苷全稱(chēng)腺嘌呤核苷，是一種廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)外的重要信號(hào)分子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生理生化功能，在循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。前期研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外的腺苷具有細(xì)胞毒作用，它可通過(guò)腺苷受體或腺苷轉(zhuǎn)運(yùn)體激活多種死亡途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，因此近年來(lái)已成為抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。線(xiàn)粒體是生物能量代謝和發(fā)生氧化磷酸化的主要場(chǎng)所，是細(xì)胞中產(chǎn)生三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)和活性氧(Reactiv

2、e Oxygen Species，ROS)的一個(gè)重要部位，越來(lái)越多的研究顯示線(xiàn)粒體在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中發(fā)揮了極為重要的作用。
　　我們前期研究發(fā)現(xiàn)腺苷可通過(guò)激活Caspase-8/9/3誘導(dǎo)肝癌Huh-7、HepG2細(xì)胞發(fā)生Caspase依賴(lài)的凋亡;此外，腺苷還可通過(guò)上調(diào)AMID表達(dá)，促AMID從胞漿入核，誘導(dǎo)肝癌Huh-7細(xì)胞發(fā)生非Caspase依賴(lài)的凋亡。另有研究報(bào)道，一些化療藥物可通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)ROS水平誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而

3、，腺苷是否通過(guò)線(xiàn)粒體途徑誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡以及ROS是否參與介導(dǎo)腺苷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡目前仍未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　探討腺苷在肝癌研究中的意義，明確腺苷是否能夠通過(guò)線(xiàn)粒體依賴(lài)的途徑介導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，以及ROS在腺苷誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡中的作用，以期闡明腺苷抗腫瘤的新機(jī)制。
　　方法：
　　1.通過(guò)CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)及結(jié)晶紫染色的方法檢測(cè)腺苷對(duì)肝癌BEL-7404細(xì)胞增殖的影響。2.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)腺苷對(duì)BEL-7

4、404細(xì)胞周期的影響。3.運(yùn)用Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。4.利用Western blot、線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)、細(xì)胞線(xiàn)粒體分離等一系列實(shí)驗(yàn)技術(shù)探尋腺苷誘導(dǎo)肝癌BEL-7404細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。5.通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞內(nèi)ROS水平。6.聯(lián)合使用ROS抑制劑N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine，NAC)及腺苷處理細(xì)胞后檢測(cè)細(xì)胞ROS水平、線(xiàn)粒體膜電位變化、細(xì)胞色素C(Cytochrome C，Cyt

5、o C)的釋放以及細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
　　結(jié)果：
　　1.腺苷能顯著抑制肝癌BEL-7404細(xì)胞的增殖。2.腺苷能誘導(dǎo)BEL-7404細(xì)胞出現(xiàn)sub-G1期凋亡峰及發(fā)生明顯的G2/M期阻滯。3.運(yùn)用Annexin V/PI雙染法證實(shí)腺苷能夠誘導(dǎo)BEL-7404細(xì)胞發(fā)生凋亡且以晚期凋亡為主。4.研究發(fā)現(xiàn)腺苷上調(diào)促凋亡蛋白Bak，下調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-xl和Mcl-1的表達(dá)，使線(xiàn)粒體膜電位下降，線(xiàn)粒體間隙蛋白（SMAC/DIABL

6、O，Cyto C，凋亡誘導(dǎo)因子(Apoptosisinducing afctor, AIF)）釋放入胞漿，通過(guò)不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，激活Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。5.腺苷能顯著增加BEL-7404細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，呈劑量和時(shí)間依賴(lài)性。6.抑制ROS的生成可以逆轉(zhuǎn)腺苷誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體膜電位下降、CytoC的釋放以及細(xì)胞晚期凋亡。
　　結(jié)論：
　　研究證實(shí)，腺苷通過(guò)誘導(dǎo)肝癌BEL-7404細(xì)胞凋亡抑制其增殖;發(fā)現(xiàn)腺苷通過(guò)線(xiàn)