1、本研究從一株粒毛盤菌中分離純化出一種胞外多糖，對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征及硫酸酯化修飾，評價了此胞外多糖的耐缺氧活性，同時研究了此胞外多糖的硫酸酯化衍生物的體外抗氧化活性、體外抗凝血活性及其在高凝模型小鼠中的抗凝血作用。
　　采用高效液相凝膠滲透色譜（HPGPC）、傅里葉紅外光譜(FT-IR)、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)、核磁共振光譜（1HNMR、13C NMR、HSQC和HMBC）對LEP-1進(jìn)行表征。結(jié)果表明，LEP-1是一種雜多糖，平均

2、分子量約是473kDa，由Glc和Man兩種單糖組成，摩爾比是1.3∶1.0，主鏈?zhǔn)怯伞?)-α-Manp-(3，6→，→2)-α-Manp-(6→、→1)-β-Glcp-(6→和→1)-β-Glcp-(6→構(gòu)成，支鏈?zhǔn)恰?)-β-Glcp、→1)-α-Manp-(3，6→和→2)-α-Manp-（6→構(gòu)成，沒有三重螺旋構(gòu)象。研究發(fā)現(xiàn)，LEP-1能夠顯著延長小鼠在常壓缺氧和亞硝酸鈉中毒實(shí)驗(yàn)中的存活時間，增加血液中紅細(xì)胞數(shù)量，提高血紅蛋白

3、的濃度，且存在劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　采用三氧化硫-吡啶法對LEP-1進(jìn)行硫酸酯化修飾，得到硫酸酯化粒毛盤菌胞外多糖（SLEP-1），SLEP-1硫酸根取代度(DS)為1.97; SEM圖顯示，SLEP-1的表面形態(tài)為網(wǎng)狀;UV光譜顯示，SLEP-1在264nm附近出現(xiàn)硫酸根基團(tuán)的特征吸收峰;FT-IR光譜圖顯示，SLEP-1在1220cm-1和818cm-1處出現(xiàn)硫酸基團(tuán)的特征吸收峰;13CNMR光譜顯示，-SO3H被修飾在SLEP

4、-1中→1)-β-D-Glcp的C-6、→2)-β-D-Manp-（6→的 C-6、→2）-α-D-Manp-(6→的 C-3位和→1)-β-D-Glcp-(6→的C-3位，其中→1)-β-D-Glcp的C-6位幾乎全部被-SO3H取代。體外抗氧化試驗(yàn)結(jié)果表明，LEP-1和SLEP-1對·OH、DPPH·和O2-·有很強(qiáng)的清除作用，SLEP-1的清除能力大于LEP-1，二者均呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系;體外抗凝血實(shí)驗(yàn)表明，LEP-1和SLE

5、P-1都能有效延長正常小鼠血漿的APTT和TT，SLEP-1能更有效的延長血漿APTT和TT，二者均存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　對小鼠進(jìn)行皮下注射腎上腺素處理，建立高凝小鼠模型，然后分別腹腔注射生理鹽水、肝素（10mg·kg-1）、低劑量LEP-1(30mg·kg-1)、高劑量LEP-1(90mg·kg-1)、低劑量SLEP-1(30mg·kg-1)和高劑量SLEP-1(90mg·kg-1)，兩周后測定小鼠的出血時間(BT)及全

6、凝血時間(CT)，小鼠血漿的部分凝血酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(FIB)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性和凝血因子Xa(FXa)。與模型組相比，LEP-1低劑量組、LEP-1高劑量組、SLEP-1低劑量組和SLEP-1高劑量組小鼠的BT和CT均明顯延長;SLEP-1低劑量組和SLEP-1高劑量組的APTT均顯著延長;LEP-1高劑量組、SLEP-1低劑量組和SLEP-1高劑量組的TT均顯著延長;