1、目的：糖尿病腎病(DN)是糖尿病的重要微血管并發(fā)癥之一，多數(shù)研究認(rèn)為20％～30％的糖尿病患者發(fā)生DN。DN早期的病變特點(diǎn)為腎小球基底的增厚以及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的增生，從而導(dǎo)致腎小球的高濾過(guò)和微量白蛋白尿。系膜細(xì)胞在這些病理過(guò)程中起著重要作用。盡管嚴(yán)格的控制血糖、血壓以及血脂可以減少DN發(fā)生的危險(xiǎn)性，但仍然不能完全阻止糖尿病患者從早期DN進(jìn)展至終末期腎病(ESRD)。DN的發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚，目前研究證實(shí)，高血糖、血流動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞

2、因子等多種因素參加與了DN的發(fā)生。近年來(lái)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)/smad信號(hào)通路在DN發(fā)病中的作用日益受到關(guān)注，研究證實(shí)了TGF-β/smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了ECM沉積，DN腎臟纖維化形成的過(guò)程。而泛素-蛋白酶體途徑(UPP)是一種細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的重要的特異性降解途徑，泛素介導(dǎo)的蛋白酶體降解是調(diào)節(jié)TGF-β/smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能的重要機(jī)制之一，在UPP中E3泛素連接酶Smurf2可選擇性泛素化降解TGF-β下游信號(hào)Smad蛋白

3、。但糖尿病時(shí)UPP如何調(diào)節(jié)TGF-β/smad信號(hào)通路，參與DN發(fā)病，尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。為進(jìn)一步明確Smad蛋白在DN時(shí)的變化以及UPP在糖尿病Smad信號(hào)中的作用，本研究觀察了高糖刺激后大鼠腎小球系膜細(xì)胞(GMC)胞內(nèi)信號(hào)蛋白Smad和Smad泛素化調(diào)節(jié)因子-Smurf的表達(dá)，并以蛋白酶體特異性抑制劑MG132作為泛素-蛋白酶體途徑阻斷劑，初步探討了泛素化降解及smad信號(hào)蛋白在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中的作用，為DN的防治尋求新的理論依據(jù)。

4、 方法：將體外培養(yǎng)的大鼠HBZY-1腎小球系膜細(xì)胞株分為7組。分別設(shè)： ①正常對(duì)照組(葡萄糖濃度5.6mmol/L)； ②20mmol/L高糖組； ③30mmol/L高糖組； ④甘露醇組(24.4mmol/L甘露醇作為滲透壓對(duì)照)； ⑤正常組加MG132(1μmol/L)組； ⑥30mmol/L高糖加MG132組； ⑦30mmol/L高糖加二甲基亞砜(1μmol/LDMSO

5、)組。 用細(xì)胞免疫熒光染色法及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)各組系膜細(xì)胞泛素連接酶Smurf2及TGF-β下游信號(hào)蛋白Smad2/3、Smad7的表達(dá)。 結(jié)果： 1、正常組系膜細(xì)胞Smurf2、Smad2/3蛋白表達(dá)較弱，Smad7蛋白表達(dá)較強(qiáng)。 2、高糖組系膜細(xì)胞Smurf2、Smad2/3表達(dá)較正常糖組均增強(qiáng)(P<0.05)，Smad7表達(dá)減弱(P<0.05)，甘露醇組系膜細(xì)胞較正常糖組均無(wú)明顯變化(P>0.0