室內人工飼養(yǎng)中華蜜蜂技術及卵顯微注射ECFP基因的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中華蜜蜂(ApisceranaceranaFabricius,簡稱中蜂)是我國寶貴的蜂種資源。中蜂卵和幼蟲的室內人工飼養(yǎng)至今尚未成功。建立完整的室內人工飼養(yǎng)中蜂卵和幼蟲的技術體系,是研究中蜂的營養(yǎng)需要、生長發(fā)育及轉基因工作的前提;在此基礎上,對蜜蜂開展卵顯微注射轉基因研究是利用蜜蜂作為生物反應器生產動物藥用蛋白的基礎工作。 本研究以中華蜜蜂卵和幼蟲為研究對象,以實驗室內其正常發(fā)育為目標,模擬自然狀況下蜜蜂卵和幼蟲發(fā)育的環(huán)境條件,

2、探索可行的蜜蜂卵和幼蟲的飼養(yǎng)模式;以ECFP基因為目的基因,通過卵顯微注射方法,將外源基因導入蜜蜂卵內,嘗試建立蜜蜂卵顯微注射轉基因的方法。獲得如下試驗結果: 1.在實驗室內成功實現(xiàn)了對中蜂卵的人工培養(yǎng)。人工培養(yǎng)0-6h之內的卵(95%R.H,34℃),其存活率為11.1%: 2.通過篩選,獲得了比較理想的中蜂幼蟲同糧營養(yǎng)配方,為大規(guī)模進行中蜂幼蟲的人工培養(yǎng)提供了營養(yǎng)參數(shù): 3.日轉移和不轉移兩種移蟲模式下蜜蜂幼

3、蟲化蛹數(shù)差異顯著(p<0.05),不轉移組較日轉移組化蛹率高出12.7%,成活率高出9.7%,說明不轉移法優(yōu)于日轉移幼蟲的移蟲模式: 4.采用單酶切、雙酶切和PCR方法鑒定了分別含有piggyBacORF和目的基因3×P3-ECFP的質粒載體pCasper-hs-orf和pXL-BacⅡ-ECFP; 5.利用顯微注射法對中蜂0~4h卵注射ECFP基因,注射后的卵采取實驗室內人工飼養(yǎng)和放入蜂群由護理蜂照料兩種培養(yǎng)方式,熒光

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