影響SW480細胞中腸干細胞特異性標記物Musashi-1表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究腸道干細胞特異性標記物Musashi-1在SW480結(jié)直腸癌細胞株中表達的影響因素,并初步探討其中的機制。 方法:MTT法研究5-FU、奧沙利鉑及順鉑對sW480細胞體外生長的抑制作用。流式細胞儀技術(shù)檢測SP細胞比例及CD34<'+>CD44<'+>細胞比例;免疫細胞化學方法檢測BrdU(5-溴-2脫氧尿嘧啶核苷)標記情況以及細胞內(nèi)M1asashi-1表達的定位;半定量RT-PCR方法和Westem-Blot方法檢測腸

2、道干細胞特異性標記Musashi-1mR2NA和蛋白的表達。連續(xù)三次體外克隆形成試驗培養(yǎng)SW480細胞獲得高成瘤性的腫瘤細胞并擴增不同代數(shù)。 結(jié)果:5-FU不同作用時間(24、48、72h)的半數(shù)抑制濃度分別為32.12、16.2和6.8 mg/l,SP細胞比例、CDD34<'+>CD44<'+>細胞以及Musashi-1 mRNA和蛋白表達在5-Fu作用后均增加(P<0.05)。奧沙利鉑、順鉑作用48h的半數(shù)抑制濃度分別為8.

3、02和6.2 mg/l,同時Musashi-1 mRNA表達增加(P<0.05)。隨著克隆形成試驗進行,克隆形成率呈增加;克隆形成試驗獲得的第一代與第二代細胞中SP細胞比例、BrdU滯留試驗的BrdU陽性率以及.Musashi-1的RNA和蛋白表達均高于未處理的SW480細胞(P<0.05),而第四代細胞的各項檢測結(jié)果與原細胞株相比無增高(P>0.05);免疫細胞化學將Musashi-1蛋白定位胞漿內(nèi)。 結(jié)論:5-FU、奧沙利鉑

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