1、目的:構(gòu)建攜帶hIL-1Ra或hIL-10表達序列的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒,并檢測重組逆轉(zhuǎn)錄病毒對體外培養(yǎng)的兔滑膜細胞的轉(zhuǎn)染情況和目的基因的表達水平與持續(xù)時間.方法:1.分離人外周血單個核細胞,提取RNA,RT-PCR擴增目的基因并純化.2.酶切、連接目的基因與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN,篩出陽性克隆,測序鑒定.3.擴增重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN-hIL-1Ra、pLXSN-hIL-10,分別與輔助質(zhì)粒pVSVG通過磷酸鈣-共沉淀法共轉(zhuǎn)染GP2

2、-293包裝細胞,收集病毒,鑒定并測定滴度.4.將獲得的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒rRV-hIL-1Ra、rRV-hIL-10分別轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的兔滑膜成纖維樣細胞.RT-PCR測定目的基因mRNA表達水平與時間的關(guān)系.免疫組化與western blotting測定目的蛋白的表達水平與持續(xù)時間.題目2：核轉(zhuǎn)錄因子κB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜中的表達及意義;目的:檢測核轉(zhuǎn)錄因子κB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜組織中的表達及活化情況,初探NFκB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制中