1、目的:
　　 現(xiàn)時糖尿病已經(jīng)發(fā)展成為全球高度關注的疾病，患病增長率極高。近幾十年來，隨著人們生活水平的不斷提高，高脂飲食的攝入過多，肥胖患者不斷增加，血脂代謝異常對糖尿病的危害以及防治也受到越來越多的重視。來自于腸的信號可增強胰島對營養(yǎng)物質的應答反應，這個作用被稱為“腸促胰島素反應”。胰高血糖素樣肽1（Glucagon like peptide-1，GLP-1）是腸-胰島軸中最為重要的激素介質，主要通過與其特異性受體相結合而發(fā)揮

2、作用。因此，GLP-1受體(GLP-1R)的存在與功能的正常對于GLP-1的功能發(fā)揮有著至關重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者對外源性GLP-1刺激的反應比較遲鈍，且胰島細胞GLP-1R表達減少。肥胖或血游離脂肪酸的升高同樣也可導致患者腸-胰軸功能受損，參與糖尿病病程的進展，但是對于其機制仍不是很清楚。本研究通過體外建立脂毒性胰島β細胞模型，進一步通過細胞水平探討其與腸-胰島軸的相關性及作用機制。
　　 方法:
　　 1

3、.倒置相差顯微鏡觀察0.5mM棕櫚酸(Palmitate，PA)作用MIN6細胞48小時后細胞形態(tài)變化;
　　 2.利用MTT實驗檢測在0、0.1、0.3、0.5mmol/L PA濃度干預MIN6細胞12h、24h、48h后細胞活性的變化;并利用WB技術檢測凋亡相關蛋白CHOP、caspase3的表達;
　　 3.采用免疫熒光細胞化學技術及Western blot(WB)檢測不同濃度棕櫚酸干預后MIN6細胞后GLP-1R

4、蛋白的表達情況;并利用熒光定量PCR檢測MIN6細胞GLP-1R mRNA水平變化;WB檢測PKB、PKCα蛋白及磷酸化水平變化;
　　 4.分別予高糖或高糖+GLP-1刺激MIN6細胞，ELISA法檢測MIN6細胞培養(yǎng)液上清胰島素含量的變化;
　　 5.利用含DN-PKB及CA-PKB的質粒轉染細胞，PI3K抑制劑LY294002，PKC激活物TPA與PKCα特異性抑制劑safingol分別干預MIN6細胞，Weste

5、m blot檢測PKB、PKCα及其磷酸化蛋白表達情況，并利用熒光定量PCR及WB技術檢測GLP-1R表達情況。
　　 結果:
　　 1.正常對照組（BSA組）MIN6細胞堆聚生長，細胞間及貼壁均較牢;0.5mM PA作用于細胞48小時，細胞體積變小、變形，貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。
　　 2.PA干預12小時，細胞活性無明顯改變;高濃度PA干預24小時后細胞活性已有下調;繼續(xù)干預48h后，發(fā)現(xiàn)隨PA濃度增大

6、細胞活性明顯下降，并且呈現(xiàn)出一定的量效相關性。
　　 3.與正常對照組比較，MIN6細胞PA干預后，GLP-1R mRNA及蛋白水平均顯著下調，并與棕櫚酸濃度及作用時間呈濃度依賴性和時間依賴性。
　　 4.與正常對照組比較，MIN6細胞予0.5mM PA處理48h后，PKCα(ser657)磷酸化增強，PKB(ser473)磷酸化減弱。
　　 5.與正常對照組比較，MIN6細胞予0.5mM PA處理48h后，葡萄

7、糖刺激胰島素釋放作用減弱，同時GLP-1刺激MIN6細胞釋放胰島素作用受損。
　　 6.TPA干預4小時后，PKCα活性明顯增強，GLP-1RmRNA水平表達下調。加入SAF后細胞PKCα磷酸化水平減弱，而GLP-1R表達無明顯變化;與正常對照組比較，含DN-PKB的質粒轉染MIN6細胞后，Akt活性減弱，而GLP-1R表達減少，而含CA-PKB的質粒轉染MIN6細胞后，Akt活性增強，GLP-1 R表達上調;
　　 結

8、論:
　　 1.長時間的高濃度棕櫚酸作用于MIN6細胞可引起細胞變形，凋亡增多，并導致胰島功能受損;
　　 2.高濃度棕櫚酸長時間作用后可導致MIN6細胞GLP-1R表達明顯下調，p-PKB(ser473)水平下調及p-PKCα(ser657)上調，GLP-1促進MIN6細胞釋放胰島素作用減弱。
　　 3.棕櫚酸導致MIN6細胞GLP-1R下調與PKB信號通路抑制有關，PKCα信號通路可能并不直接參與GLP-1R