1、目的：糖尿病性視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy, DR）是糖尿病的一種常見微血管并發(fā)癥，是一種神經(jīng)血管性疾病，氧化應(yīng)激學(xué)說是DR主要發(fā)病機(jī)制之一。高血糖或糖尿病(diabetes mellitus，DM)時(shí)氧化應(yīng)激反應(yīng)將增強(qiáng)并導(dǎo)致視網(wǎng)膜組織損傷。Nrf2/ARE信號(hào)通路是非常重要的內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激通路，當(dāng)活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）或親電試劑刺激核因子EF-E2相關(guān)因子(nucl

2、ear factor erythroid2-related factor2，Nrf2)時(shí)，Nrf2轉(zhuǎn)移入核內(nèi)，識(shí)別并結(jié)合抗氧化反應(yīng)元件(antioxidantresponse element，ARE)，啟動(dòng)血紅素氧合酶1(heme oxygenase1，HO-1)等下游抗氧化基因蛋白的轉(zhuǎn)錄，增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷，從而保護(hù)視網(wǎng)膜。本實(shí)驗(yàn)通過采用高脂高糖飲食結(jié)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(strepptozotocin，STZ

3、)的方法制備2型糖尿病大鼠模型，研究叔丁基對(duì)苯二酚(tert-butyl hydroquinone，tBHQ)對(duì)2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)Nrf2/ARE信號(hào)通路表達(dá)的影響，探討tBHQ對(duì)視網(wǎng)膜是否具有保護(hù)作用及其機(jī)制，以期為DR防治提供理論依據(jù)。
　　方法：選取體重在180～200g的4w齡SD雄性大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，隨機(jī)分成正常對(duì)照組（NC組，n=20）和造模組(n=40)，NC組給與基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，造模組給予高

4、脂高糖飼料喂養(yǎng)，1月后待造模組大鼠空腹12h之后給與腹腔注射30mg/kg的小劑量STZ建立2型糖尿病大鼠模型（7d后尾部采血測(cè)定空腹血糖濃度若大于16.7mmol/L說明建立模型成功），NC組予以相同體積的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射作為對(duì)照。造模成功者，隨機(jī)分成糖尿病組(DM組)、藥物干預(yù)組(tBHQ組)。tBHQ組于成模后1w使用添加1％ tBHQ的高脂高糖飼料喂養(yǎng)，而NC組、DM組飼養(yǎng)方法不變。tBHQ干預(yù)的第4w、第12w末

5、時(shí)，檢測(cè)各組大鼠體重，心臟穿刺采血測(cè)定其血糖、血脂水平。取大鼠眼球，部分用于HE染色觀察視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)的改變及免疫組化檢測(cè)Nrf-2、HO-1蛋白在視網(wǎng)膜組織中的分布，剩余眼球視網(wǎng)膜組織用于熒光定量PCR檢測(cè)Nrf-2、HO-1 mRNA在視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、35只大鼠成功建立了2型糖尿病大鼠模型，成模率為87.5％。2、一般情況:DM組、tBHQ組大鼠逐漸出現(xiàn)體重減輕、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、多食、多尿、多飲等癥狀，

6、tBHQ組上述情況較DM組輕，接近于NC組。NC組大鼠體重正常、精神佳、飲食飲水正常。3、生化指標(biāo)與NC組相比，4w與12w DM組血糖明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.015，2.977，P=0.000，0.000，均P＜0.01）;與NC組相比，4w與12wtBHQ組血糖明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.915，5.018，P=0.000，0.000，均P＜0.01);與12w DM組相比，12w tBHQ組的血糖下降，差異有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義（t=3.415，P=0.002，P＜0.01）;與NC組相比，4w與12w DM組總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FTC=65.641，F(xiàn)TG=63.415，F(xiàn)LDL=61.241，P=0.01，0.01，0.01，均P＜0.05)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL)降低(FHDL=58.317，P=0.02，P＜0.05)。與NC組相比，4w與12w tBHQ組總膽固醇(TC

8、)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)升高(FTC=48.810, FTG=51.443, FLDL=53.127, P=0.03,0.02,0.02，均P＜0.05)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL)降低(F=49.312，P=0.03，P＜0.05)。4、組織學(xué)變化:HE染色顯示，4w NC組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯病理改變;DM組大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞排列稍紊亂，內(nèi)外核層稍融合，出現(xiàn)不同程度細(xì)胞水腫的現(xiàn)象;tBHQ組大鼠視

9、網(wǎng)膜細(xì)胞排列較整齊，個(gè)別細(xì)胞可見輕度水腫。12w NC組大鼠視網(wǎng)膜組織HE染色顯示視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)基本正常，排列基本整齊，余未見明顯病理變化;DM組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)排列疏松，內(nèi)、外核層排列紊亂，細(xì)胞水腫現(xiàn)象明顯;tBHQ組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)較清晰，部分細(xì)胞水腫，余未見明顯異常。5、免疫組織化學(xué)結(jié)果:與NC組比較，4w DM組大鼠視網(wǎng)膜組織中Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)增多（tNrf2=3.115，PNrf2=0.002，Nrf2＜0.01

10、;tHO-1=3.485，PHO-1=0.000，PHO-1＜0.01），4w tBHQ組Nrf2、HO-1表達(dá)高于4w DM組(tNrf2=2.473,PNrf2=0.031,PNrf2＜0.05;tHO-1=2.785,PHO-1=0.024,PHO-1＜0.05);與NC組比較，12w DM組Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)增多(tNrf2=3.781, PNrf2=0.000, PNrf2＜0.01;tHO-1=3.785, PHO-

11、1=0.000,PHO-1＜0.01);12w tBHQ組表達(dá)高于12w DM組（tNrf2=2.576，PNrf2=0.038，PNrf2＜0.05;tHO-1=2.879，PHO-1=0.018，PHO-1＜0.05）;12w DM組Nrf2表達(dá)較4w DM組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=0.276，P=0.040，P＜0.05）;12w tBHQ組Nrf2、HO-1表達(dá)高于4w tBHQ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（tNrf2=2.516，P

12、Nrf2=0.042,PNrf2＜0.05;tHO-1=2.776,PHO-1=0.037,PHO-1＜0.05）。6、熒光定量PCR.與NC組比較，4w DM組Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)增多(tNrf2=4.758, PNrf2=0.031,PNrf2＜0.05; tHO-1=5.114, PHO-1=0.029, PHO-1＜0.05);4w tBHQ組表達(dá)高于4w DM組（tNrf2=5.133，PNrf2=0.023，PN

13、rf2＜0.05;tHO-1=4.758，PHO-1=0.033，PHO-1＜0.05）;與NC組比較，12w DM組Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)增多(tNrf2=4.285，PNrf2=0.041，PNrf2＜0.05;tHO-1=4.514, PHO-1=0.037,PHO-1＜0.05);12w tBHQ組Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)高于12w DM組（tNrf2=4.976，PNrf2=0.028，PNrf2＜0.05;

14、tHO-1=4.251，PHO-1=0.039，PHO-1＜0.05）;12w DM組Nrf2 mRNA表達(dá)高于4w DM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.114，P=0.022，P＜0.05）;12wtBHQ組Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)高于4w tBHQ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tNrf2=4.292，PNr2=0.040,PNrf2＜0.05;tHO-1=4.974,PHO-1=0.028,PHO-1＜0.05)。
　　結(jié)論:①