1、胃癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，雖然近年其發(fā)病率有下降，但惡性腫瘤死亡人數(shù)中胃癌仍占首位。引起胃癌病人死亡的主要原因是腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。盡管在臨床上原發(fā)灶轉(zhuǎn)移一直是影響腫瘤療效的主要因素，但轉(zhuǎn)移是一個(gè)發(fā)生在活體內(nèi)、難以被觀察到的隱匿過程，臨床醫(yī)師對(duì)轉(zhuǎn)移過程的關(guān)注往往不如對(duì)轉(zhuǎn)移結(jié)果的重視，對(duì)腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)過程更是缺乏了解。 惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素、多階段、涉及多基因參與調(diào)控的病理過程。從基因水平上研究腫瘤進(jìn)展

2、的分子機(jī)制，獲取腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)各期相關(guān)基因及對(duì)這些基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，可為腫瘤的分子病理診斷、臨床預(yù)后判斷及治療方案的選擇提供理論指導(dǎo)，因而成為當(dāng)前深入研究和關(guān)注的熱點(diǎn)之一。 在胃癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移相關(guān)研究中，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)諸多如EGFR、bFGF、MMPS、E-CD和MDR1等基因參與其發(fā)展、演進(jìn)過程，任何一個(gè)基因的mRNA及其蛋白表達(dá)都是在其他基因表達(dá)所構(gòu)成的背景下完成的。傳統(tǒng)對(duì)胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的研究?jī)H局限于單一轉(zhuǎn)移相關(guān)基因

3、，不能反映胃癌轉(zhuǎn)移的潛勢(shì)，同時(shí)各研究室報(bào)道的結(jié)果也不盡一致，缺乏同等水平的可比性，因此我們從了解單個(gè)基因表達(dá)走向探討多個(gè)基因構(gòu)成的表達(dá)模式，選擇claudin1、cx43、CYR61、NOV、snail等五個(gè)基因，從它們的mRNA及其相應(yīng)蛋白水平進(jìn)行研究。Claudin1和cx43是構(gòu)成細(xì)胞間連接的重要的連接蛋白，CYR61和NOV同屬于CCN家族成員，是一種分泌型，富含半胱氨酸的肝磷脂結(jié)合蛋白，鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail屬于snail超家

4、族成員。研究發(fā)現(xiàn)在不同腫瘤中它們的表達(dá)改變不盡相同，可能在不同腫瘤中它們發(fā)揮不同的作用。迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)于Claudin1、cx43、CYR61、NOV和snail這五個(gè)基因在胃癌中的表達(dá)情況報(bào)道很少。 組織芯片(TissueChip，TC)，又稱組織微陣列(TissueMicroarray,TMA)，是一種以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)新技術(shù)。其為醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)提供了一種高通量、大樣本以及快速的分子水平的分析工具。 本實(shí)

5、驗(yàn)搜集紹興市第一人民醫(yī)院1995年-2000年間的100例手術(shù)切除胃癌標(biāo)本，并隨機(jī)選取同期25例正常胃粘膜組織標(biāo)本作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括復(fù)習(xí)病歷和HE切片，由有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生核實(shí)臨床病理診斷，選取樣點(diǎn)做成組織芯片，然后分別采用原位雜交及免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)claudin-1、cx43、CYR61、NOV和snailmRNA和claudin-1及cx43蛋白的表達(dá)情況，最后結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果、臨床病理資料及隨訪資料進(jìn)行綜合分析。 統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、采用SPSS13.0軟件包，包括X2檢驗(yàn)、Spearman等級(jí)相關(guān)分析、Kaplan-Meier生存曲線分析、時(shí)-序檢驗(yàn)等。P值以0.05作為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。 原位雜交的結(jié)果表明，在100例胃癌和25例正常胃粘膜組織中，claudin1mRNA、cx43mRNA和NOVmRNA的表達(dá)率分別依次為42％(42/100)與100％(25/25)，35％(35/100)與88％(22/25)和50％(50/100)與64％(16/25

7、)。claudin1mRNA的表達(dá)與TNM分期(r=-0.303，P=0.015)、浸潤(rùn)深度(r=-0.259，P=0.021)、脈管侵犯(r=-0.312，P=0.002)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=-0.307，P=0.002)呈負(fù)相關(guān)；cx43mRNA腫瘤大小(r=-0.377，P=0.000)、TNM分期(r=-0.306，P=0.021)、浸潤(rùn)深度(r=-0.288，P=0.016)、脈管侵犯(r=-0.206，P=0.039)、淋巴結(jié)

8、轉(zhuǎn)移(r=-0.258，P=0.010)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(r=-0.235，P=0.019)呈負(fù)相關(guān)；NOVmRNA的表達(dá)與浸潤(rùn)深度(r=-0.262，P=0.009)和分化程度(r=-0.244，P=0.015)呈負(fù)相關(guān)。Claudin1mRNA和Cx43mRNA陽(yáng)性表達(dá)病例的平均生存時(shí)間和5年生存率均明顯高于陰性表達(dá)的病例(P＜0.01)，Claudin1mRNA和Cx43mRNA陽(yáng)性表達(dá)病例的預(yù)后較好；NOVmRNA的表達(dá)與胃癌患者的生

9、存情況無(wú)顯著相關(guān)性，因此不能夠作為指導(dǎo)預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。而100例胃癌中CYR61mRNA和snailmRNA在胃癌和正常胃粘膜中的表達(dá)率分別是37％(37/100)與4％(1/25)，和46％(46/100)與16％(4/25)。CYR61mRNA的陽(yáng)性率與腫瘤大小(r=0.318，P=0.001)、TNM(r=0.331，P=0.007)、浸潤(rùn)深度(r=0.253，P=0.014)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.285，P=0.004)呈正相

10、關(guān)；snailmRNA的陽(yáng)性率與TNM(r=0.176，P=0.027)、分化程度(r=0.203，P=0.042)、脈管侵犯(r=0.208，P=0.038)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.299，P=0.003)呈正相關(guān)。CYR61mRNA和snailmRNA陽(yáng)性表達(dá)病例的平均生存時(shí)間和5年生存率均明顯低于陰性表達(dá)的病例(P＜0.01)，CYR61mRNA和snailmRNA陽(yáng)性表達(dá)病例的預(yù)后相對(duì)較差。Cox多因素分析claudin1mRNA

11、的表達(dá)水平不僅與胃癌預(yù)后相關(guān)，而且還是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立因素(OR=0.036)。 免疫組化的結(jié)果表明，100例胃癌中claudin-1蛋白及cx43蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為43％、40％；claudin1蛋白的陽(yáng)性率與腫瘤大小(r=-0.207，P=0.039)、浸潤(rùn)深度(r=-0.292，P=0.013)、TNM分期(r=-0.371，P=0.002)、脈管侵犯(r=-0.333，P=0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=-0.366

12、，P=0.002)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(r=-0.249，P=0.013)呈負(fù)相關(guān)；cx43蛋白的陽(yáng)性率也與腫瘤大小(r=-0.208，P=0.037)、浸潤(rùn)深度(r=-0.279，P=0.012)、TNM分期(r=-0.346，P=0.002)、脈管侵犯(r=-0.352，P=0.000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=-0.351，P=0.000)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(r=-0.223，P=0.026)和神經(jīng)侵犯(r=-0.286，P=0.004)呈負(fù)相關(guān)；clau