1、強直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是一種由多病因引起的復雜的疾病，可能與基因和環(huán)境等多種因素有關。強直性脊柱炎的患者大多數(shù)為年輕男性，其疾病特征為炎癥和關節(jié)僵直，部位主要累及脊柱及外周關節(jié)。HLA-B27作為與強直性脊柱炎(AS)相關性最強的基因已經(jīng)被研究了很多年，在過去的研究中雖取得了一定進步，但在尋找疾病易感基因方面的研究進展非常緩慢。和其他復雜性疾病如炎癥性腸病相比，AS可被識別的易感基因非常少。E

2、RAP1和IL23R的發(fā)現(xiàn)說明這些基因可能與關節(jié)僵直的發(fā)病有關。在全基因組學的相關研究中，辨別并證明相關基因及其變體是否與AS發(fā)病有關是一項非常難的挑戰(zhàn)。
　　成骨細胞在骨的形成以及骨的鈣化中起著重要作用，并且調(diào)節(jié)著破骨細胞的分化。骨髓干細胞中Runx2轉錄因子的高表達，促使其分化為成骨細胞。成骨細胞調(diào)節(jié)破骨細胞的分化還通過巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)，細胞核因子Kappa-B受體活化因子配體(RANKL)和骨保護素(OPG

3、)。巨噬細胞集落刺激因子使破骨細胞的前體細胞池擴大，并增加它們的存活率。細胞核因子Kappa-B受體活化因子配體是破骨細胞形成的必備分子，與破骨細胞前體細胞的RANK受體相互作用，從而促進破骨細胞的分化。骨保護素與細胞核因子Kappa-B受體活化因子配體相互作用，抑制破骨細胞的形成。其他影響成骨細胞-破骨細胞平衡關系的因子，還包括甲狀旁腺激素（parathyroid hormone PTH）和前列腺素E2(prostaglandin E

4、2 PGE2)。成骨細胞在骨形成過程中要經(jīng)歷成骨細胞增殖、細胞外基質成熟和細胞外基質礦化過程，成骨細胞成熟及細胞外基質成熟的重要標志之一是堿性磷酸酶的活性，可采用ALP試劑盒對細胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性進行檢測。
　　當阻斷CNTF時，可以導致運動神經(jīng)元的丟失和運動綜合征，但是與VEGF丟失相比，它的損傷就相對較輕。在強直性脊柱炎的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的區(qū)域，CNTF的表達相對性降低。另外在強直性脊柱炎病人的血清中，CNTF的水平逐漸升高

5、，尤其是當腰椎受到侵犯時。在運動神經(jīng)元損傷的小鼠模型中，皮下注射CNTF可以對運動神經(jīng)元起到保護作用。CNTFR在骨骼肌和神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，在外周組織中，骨骼肌、皮膚、肺、腸、腎、肝、脾和胸腺中都表達CNTFR，其中以骨骼肌中表達含量最高。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，CNTFR表達在小腦，后腦、中腦、丘腦、下丘腦、紋狀體、海馬、皮質等部位，其中以小腦的表達最高。CNTFR由CNTFRa、糖蛋白(gpl30)和LIFRβ三種成分構成，其中CNTF

6、Ra是它的核心結構，分子量大約在52kD左右。糖蛋白(gpl30)在IL-6家族中起著信號傳導的作用。LIFRβ是LIF的結合蛋白，LIFRβ的胞漿部分沒有蛋白激酶活性和GTP結合位點，但并行排列的信號傳遞體gpl30和LIFRβ與Jak-Tyk激活有關，故gpl30、LIFRβ與信號傳導有關。
　　我們通過基因芯片檢測強直性脊柱炎病人與正常病人的基因表達差異，發(fā)現(xiàn)C7、C3、ENTPD3、HBA2、FAM70A、 DSG2、AN

7、GPT1、ACVR1C、CNTFR、FMO2、RERGL、SLPI、IL7R、HP基因在強直性脊柱炎病人的髖關節(jié)韌帶中表達較正常病人表達增加。PAMR1、KCNA1、FGFBP2、PPP4R4、CRTAC1、MAMDC2、GPR64、GALNT13、F5、NOV、PIEZO2、LPAR4、CDH13、ITGA11、Q6ZUQ1、PIEZO2、ARNTL2、TNXB、NRK、GPSM2和HTR2A基因在強直性脊柱炎病人的髖關節(jié)韌帶中表達較

8、正常病人表達降低。其中CNTFR在骨骼肌和神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，且在強直性脊柱炎病人中表達也升高，另外，當阻斷CNTF時，可以導致運動神經(jīng)元的丟失和運動綜合征，強直性脊柱炎病人的血清中，CNTF的水平逐漸升高，尤其是當腰椎受到侵犯時。在運動神經(jīng)元損傷的小鼠模型中，皮下注射CNTF可以對運動神經(jīng)元起到保護作用。因此我們推測CNTFR可能與強直性脊柱炎相關。成骨細胞在骨的形成以及骨的鈣化中起著重要作用，并且調(diào)節(jié)著破骨細胞的分化，在強直性脊柱炎

9、的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。成骨細胞成熟及細胞外基質成熟的重要標志之一是堿性磷酸酶的活性。因此用CNTF處理激活CNTFR，并用成骨細胞的堿性磷酸酶活性檢測來觀察CNTFR是否與強直性脊柱炎相關，理論上是可行的。
　　第一部分、強直性脊柱炎病人髖關節(jié)韌帶基因芯片的檢測
　　目的：探索與強直性脊柱炎相關的基因。
　　方法：我們對選取3例強直性脊柱炎病人和3例正常病人，取他們的髖關節(jié)韌帶，將組織送予公司檢測基因芯片，明確強直

10、性脊柱炎病人與正常病人基因表達的差異。
　　結果：
　　┏━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━┓
　　┃Symbol ┃ GeneBank ┃ Fold change ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃ PAMR1 ┃NM_001001991.2 ┃ 0.29 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━

11、━━━━┫
　　┃ KCNA1 ┃ NM_000217.2 ┃ 0.31 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃ FGFBP2 ┃ NM_031950.3 ┃ 0.31 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃ PPP4R4 ┃ NM_020958.2 ┃ 0.33

12、 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃ CRTAC1 ┃NM_001206528.2 ┃ 0.33 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃MAMDC2 ┃ NM_153267.4 ┃ 0.35 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃ GPR64 ┃NM

13、_001079847.2 ┃ 0.37 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃ GALNT13 ┃NM_001301627.1 ┃ 0.37 ┃
　　┣━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━┫
　　┃ F5 ┃ NM_000130.4 ┃ 0.39 ┃
　　┗━━━━━┻━━━━━━━━┻

14、━━━━━━━━┛
　　┏━━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━┓
　　┃ NOV ┃ NM_002514.3 ┃ 0.4 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ PIEZO2 ┃ NM_022068.3 ┃ 0.41 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ LPAR4

15、 ┃NM_001278000.1 ┃ 0.42 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ CDH13 ┃NM_001220488.1 ┃ 0.46 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ ITGA11 ┃NM_001004439.1 ┃ 0.46 ┃
　　┣━━━━━━╋━━

16、━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ Q6ZUQ1 ┃NM_001010917.2 ┃ 0.46 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ PIEZO2 ┃ NM_022068.3 ┃ 0.47 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ ARNTL2 ┃NM_001248002.1

17、 ┃ 0.48 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ TNXB ┃ NM_019105.6 ┃ 0.49 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ NRK ┃ NM_198465.3 ┃ 0.49 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ GP

18、SM2 ┃ NM_013296.4 ┃ 0.5 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ HTR2A ┃ NM_000621.4 ┃ 0.5 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ C7 ┃ NM_000587.2 ┃ 2 ┃
　　┣━━━━━

19、━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ C3 ┃ NM_000064.3 ┃ 2.1 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ ENTPD3 ┃ NM_001248.3 ┃ 2.12 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ HBA2 ┃ NM_000517.4

20、 ┃ 2.12 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ FAM70A ┃NM_001104544.1 ┃ 2.21 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ DSG2 ┃ NM_001943.3 ┃ 2.23 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　

21、┃ ANGPT1 ┃ NM_001146.3 ┃ 2.23 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ ACVR1C ┃NM_001111031.1 ┃ 2.26 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ CNTFR ┃NM_001207011.1 ┃ 2.37 ┃
　　┣━

22、━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ FMO2 ┃NM_001301347.1 ┃ 2.49 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ RERGL ┃NM_001286201.1 ┃ 2.52 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ SLPI ┃ NM_003064.

23、3 ┃ 2.88 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ 1L7R ┃ NM_002185.3 ┃ 2.95 ┃
　　┣━━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━┫
　　┃ HP ┃NM_001126102.1 ┃ 4.65 ┃
　　┗━━━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━━┛

24、r>　　結論：
　　C7、 C3、 ENTPD3、 HBA2、 FAM70A、 DSG2、 ANGPT1、 ACVR1C、 CNTFR、 FMO2、RERGL、 SLPI、 IL7R、 HP基因在強直性脊柱炎病人的髖關節(jié)韌帶中表達較正常病人表達增加。PAMR1、 KCNA1、 FGFBP2、 PPP4R4、 CRTAC1、 MAMDC2、 GPR64、 GALNT13、F5、 NOV、 PIEZO2、 LPAR4、 CDH13、

25、ITGA11、 Q6ZUQ1、 PIEZO2、 ARNTL2、 TNXB、NRK、 GPSM2和HTR2A基因在強直性脊柱炎病人的髖關節(jié)韌帶中表達較正常病人表達降低。
　　第二部分、驗證強直性脊柱炎病人CNTFR基因的表達
　　目的：明確強直性脊柱炎病人CNTFR基因的表達。
　　方法：分別取2例強直性脊柱炎病人的髖關節(jié)韌帶作為實驗組，和2例正常人的髖關節(jié)韌帶作為對照組，用western-blot法檢測CNTFR基因的

26、蛋白質水平表達，比較兩組的差異。
　　結果：western-blot法檢測后發(fā)現(xiàn)，強直性脊柱炎病人髖關節(jié)韌帶中CNTFR蛋白的條帶顏色明顯比正常人的髖關節(jié)韌帶的深。
　　結論：強直性脊柱炎病人CNTFR基因的蛋白質水平表達明顯升高第三部分 CNTF處理對成骨細胞堿性磷酸酶活性的影響目的明確CNTF處理對成骨細胞堿性磷酸酶活性的影響方法在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)成骨細胞，當細胞融合度達到50％-70％時，進行鋪板。將實驗分為兩組，一組為C