紅豆草原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、原生質(zhì)體能夠克服性細(xì)胞的不親和障礙，進(jìn)行遠(yuǎn)緣的體細(xì)胞雜交，還可直接攝取外源的DNA、細(xì)胞器、病毒、質(zhì)粒等，是進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化研究的理想受體。本試驗(yàn)以普通紅豆草無(wú)菌苗子葉和下胚軸誘導(dǎo)的愈傷組織為材料，深入研究了紅豆草原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)條件。研究結(jié)果如下： 1.建立了紅豆草下胚軸胚性愈傷組織誘導(dǎo)體系。誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2mg/L2,4-D+0.6mg/L 6-BA，其出愈率為94.5％；增殖培養(yǎng)基為：MS+2mg/L 2,4-D+0.6

2、mg/L6-BA+400mg/L LH，繼代10d愈傷組織增長(zhǎng)量為1.72mm。 2.建立了紅豆草原生質(zhì)體快速分離體系。以愈傷組織作為游離材料其最佳酶解液成分為2％Cellulase Onozuka R-10(纖維素酶)+0.5％Pectinase(果膠酶)+0.5％Macerozyme R-10(離析酶)+5m mol/L MES+0.5mol/L甘露醇，溶于CPW溶液中，pH為5.8，在25℃黑暗條件下，于50r/min水浴

3、振蕩儀上酶解10h。以子葉作為酶解材料，最佳酶解液成分為1％Cellulase OnozukaR-10+0.8％Pectinase+0.5％Macerozyme R-10+5mmol/L MES+0.55mol/L甘露醇，pH為6.0，在25℃黑暗條件下，于50r/min水浴振蕩儀上酶解6h。 3.在三種酶解材料預(yù)處理方法中，質(zhì)壁分離法和低壓滲透法可有效提高子葉和下胚軸來(lái)源愈傷組織原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力，而黑暗低溫處理對(duì)兩種材料的

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