1、分類號S墨31：2UDC碩士學位論文抗新城疫病毒單鏈抗體(scFv)載體構(gòu)建及表達研究彭三鳳學科專業(yè)動物遣佳直弛皇鏊殖指導教師莊直逸塾援睦阻渣硒宜員論文答辯日期2Q!三生且2Q目學位授予日期——答辯委員會主席五徨坦班宜旦抗新城疫病毒單鏈抗體(scFv)載體構(gòu)建及表達研究摘要新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一類禽類呼吸道疾病，感染宿主高度致死，因此對中國乃至全球的家禽業(yè)造成巨大的威脅，至今仍無特異性治療藥物。單鏈抗體(scFv

2、)是免疫球蛋白最小的功能性結(jié)構(gòu)單元，具有抗原結(jié)合活性，且在脊椎動物與非脊椎動物中均能表達。單鏈抗體除了應用于醫(yī)學診斷與治療，還具有中和病毒的能力。本研究探索利用PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)構(gòu)建抗新城疫病毒單鏈抗體真核表達載體，分別為pB315B—CAG—puro—pGFP—scFv、pB315BEFla—puropGFP—scFv。通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將構(gòu)建的兩個重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染DF1細胞和293T細胞，獲得了

3、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染抗新城疫病毒單鏈抗體的DF1一CAG—scFv、293TCAG—scFv、DF1EFla—scFv與293TEFlascFv等4種細胞系。PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在DF1和293T細胞中的轉(zhuǎn)座效率分別為191％和258％。RTPCR結(jié)果表明，抗新城疫病毒單鏈抗體基因在4種細胞中均檢測到mRNA。通過westernblot檢測與抗新城疫病毒單鏈抗體融合的His標簽蛋白來確定其在各細胞系中的表達情況，結(jié)果表明，在上述4種轉(zhuǎn)染細胞的