1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文氯化鋰保護(hù)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞損傷分子機(jī)制的初步探討姓名：李凡申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：余克明20080526氯化鋰保護(hù)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞損傷分子機(jī)制的初步探討 中文摘要1 ．原代培養(yǎng)S D 乳鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，M A P 2 免疫熒光法鑒定神經(jīng)細(xì)胞純度。0 ．5 m M ，1 ．0 m M ，3 ．0 m M 氯化鋰( 對(duì)照組不加氯化鋰) 處理，1 2 h 后換至含O ．5％F B S 的培養(yǎng)基，進(jìn)行缺

2、血處理，3 6 h 后倒置顯微鏡下進(jìn)行拍照，比較不同組問突起長度的差異。2 ．原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，缺血處理4 0 h 后提取細(xì)胞總D N A ，電泳檢測(cè)D N A的完整性。3 ．原代培養(yǎng)S D 乳鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞，R T - P C R 檢測(cè)氯化鋰對(duì)M r e I l 、K u 、L i g a s eI V 表達(dá)的影響。4 ．R e a lt i m eR T - P C R 進(jìn)一步檢測(cè)氯化鋰對(duì)原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞L i g a

3、 s eI V ，轉(zhuǎn)錄因子C R E B 和C T C F 表達(dá)的影響。5 ．通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)G F P 陽性細(xì)胞的比例，即視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞D N A 非同源末端連接( N H E J ) 的修復(fù)效率。6 ．動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組大鼠每日皮一卜注射I ．5 m E q ／K g 氯化鋰，對(duì)照組注射等量P B S ，采用前房灌注法制造急性高眼壓缺血再灌注損傷大鼠模型，術(shù)后l 大、l 周、2 周取材，制作石蠟切片，進(jìn)行常規(guī)H E 染

4、色、D A P I 染色和原位凋亡檢測(cè)，體內(nèi)觀察氯化鋰對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果：1 ．M A P 2 免疫熒光鑒定，所培養(yǎng)視網(wǎng)膜細(xì)胞中，神經(jīng)細(xì)胞占8 0 ％。缺血處理3 6 h后，對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞突起較短( 2 2 ．0 7 士9 ．9 0 9 m ) ，加入不同濃度氯化鋰進(jìn)行處理的神經(jīng)細(xì)胞突起較長，較對(duì)照組長度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；尤其加入1 ．0 m M ( 4 8 ．7 1 + 1 5 ．9 3 1 a m ) 和3 ．0 m

5、 M ( 5 2 ．1 3 + 1 6 ．8 8 9 m ) 氯化鋰組，細(xì)胞的突起較對(duì)照組明顯增長、交織呈網(wǎng)狀。2 ．D N A 電泳結(jié)果顯示氯化鋰促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞D N A 的修復(fù)，染色體D N A 更完整，發(fā)生的斷裂較對(duì)照組明顯減少。濃度1 ．0 m M 氯化鋰為最佳。3 ．R T - P C R 檢測(cè)表明，加入1 ．0 m M 氯化鋰處理的神經(jīng)細(xì)胞中，L i g a s eI Vm R N A 的表達(dá)，較對(duì)照組有明顯增加，而K u 和