1、脂肪酶作為一種水解酶，不僅催化水解反應(yīng)而且催化有機(jī)相中酯合成和酯交換反應(yīng)。有機(jī)相酶催化自上世紀(jì)八十年代開(kāi)創(chuàng)以來(lái)，已獲得了巨大的發(fā)展，得到廣泛應(yīng)用，但還存在酶在有機(jī)相中溶解性、穩(wěn)定性差、催化效率低等缺點(diǎn)。化學(xué)修飾是克服上述缺點(diǎn)，提高酶催化功能的有效方法之一。本章研究的目的是：用具有長(zhǎng)鏈烷基的硬脂酸對(duì)Lipolase脂肪酶進(jìn)行化學(xué)修飾得到具有兩親分子結(jié)構(gòu)的修飾脂肪酶，提高修飾酶的表/界面活性及其在有機(jī)相或兩相界面的催化性能。本文研究的主要內(nèi)

2、容如下： 1．選擇合適的修飾劑并對(duì)其進(jìn)行活化：為了提高酶在有機(jī)相中的溶解性，應(yīng)在酶表面引入疏水性物質(zhì)，我們選擇長(zhǎng)鏈硬脂酸作為修飾劑。通過(guò)查閱文獻(xiàn)，比較多種活化方法，本實(shí)驗(yàn)采用N-羥基琥珀酰亞胺活化法活化硬脂酸，此方法成本低、毒性小且反應(yīng)溫和。通過(guò)紅外光譜和質(zhì)譜對(duì)硬脂酸琥珀酰亞胺酯進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析。 2．脂肪酶的修飾：由于蛋白質(zhì)分子表面游離氨基較多并且具有較高的反應(yīng)活性，因此氨基常被選為修飾基團(tuán)。此反應(yīng)即為硬脂酸琥珀酰亞胺酯

3、與脂肪酶表面氨基的反應(yīng)。反應(yīng)條件：pH值7.4、常溫磁力攪拌。分離方法：透析。通過(guò)改變脂肪酶與硬脂酸琥珀酰亞胺酯的質(zhì)量比和反應(yīng)時(shí)間得到不同修飾度的修飾酶。 3．酶活測(cè)定：對(duì)修飾酶的水解活性和有機(jī)溶劑中的酯化活性和界面催化活性進(jìn)行了測(cè)定，并與未修飾酶進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明修飾酶的水解活性略有下降，但在有機(jī)溶劑中的酯化活性和在油/水界面催化活性明顯提高。 4．有機(jī)溶劑溶解性、穩(wěn)定性及熱穩(wěn)定性測(cè)定：脂肪酶修飾后在表面存在長(zhǎng)鏈

4、烷基，分子具有兩親性，親油性增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明修飾酶在正己烷中的溶解度增加，穩(wěn)定性及熱穩(wěn)定較之未修飾酶均有所提高。 5．界面化學(xué)性能表征：酶修飾后結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化：一端是親水基，一端是疏水基，類似于表面活性劑，應(yīng)有一定的表面活性。本論文考察了修飾酶與未修飾酶水溶液的表面張力與界面張力。結(jié)果表明：與未修飾酶相比，修飾酶降低溶液表面張力與界面張力的能力提高。 6．LB膜的制備及其結(jié)構(gòu)表征：酶經(jīng)修飾后表面活性提高，更容易在界面吸