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文檔簡介
1、干擾素(IFN)是一種多功能的細(xì)胞因子,屬于Ⅱ型細(xì)胞因子家族,在脊椎動物先天性免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮著重要的作用。干擾素通過結(jié)合細(xì)胞表面受體,使JAK/STAT信號通路激活,調(diào)節(jié)下游基因表達(dá),發(fā)揮多效性功能。本研究開展了長牡蠣中干擾素分子及其受體的克隆鑒定研究,分析了干擾素分子及其受體的基本特征,驗證了干擾素的功能以及干擾素和干擾素受體的相互作用,為軟體動物中研究干擾素和受體分子,以及干擾素信號通路奠定了基礎(chǔ)。
從長牡蠣中克隆
2、獲得了類干擾素分子 CgIFNLP,cDNA全長300 b p,編碼99個氨基酸,含有一個干擾素結(jié)構(gòu)域,與脊椎動物同源分子相比,相似性和保守性較低,但高級結(jié)構(gòu)和I I型細(xì)胞因子相似。CgIFNLP mRNA在性腺,閉殼肌,血淋巴細(xì)胞,外套膜,腮,和肝胰腺中組成型表達(dá),且在腮中的表達(dá)量最高。在注射Poly(I:C)后,長牡蠣血淋巴細(xì)胞中 CgIFNLP mRNA表達(dá)量顯著升高(p<0.05)。體外重組的CgIFNLP蛋白,能引起長牡蠣血細(xì)
3、胞的凋亡水平及對燦爛弧菌的吞噬能力顯著增加,可以顯著抑制人 A549細(xì)胞的增殖。
在長牡蠣中克隆獲得了類細(xì)胞因子受體,被命名為 CgIFNR-3,cDNA全長1335 bp,編碼444個氨基酸,含有一個干擾素受體結(jié)構(gòu)域,推測是可以和干擾素結(jié)合的功能域。CgIFNR-3 mRNA在閉殼肌,血淋巴細(xì)胞,外套膜,腮,和肝胰腺中組成型表達(dá),且在血細(xì)胞中的表達(dá)水平最高。在注射 Poly(I:C)后3 h,長牡蠣血淋巴細(xì)胞中 CgIFNR
4、-3 mRNA的表達(dá)水平顯著升高。利用GST-pull down技術(shù)體外驗證了CgIFNR-3和CgIFNLP二個蛋白的相互作用;通過報告基因活性分析,在報告基因質(zhì)粒 ISRE,GAS,STAT3分別和CgIFNLP共轉(zhuǎn)染 HEK293細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn) CgIFNLP可以激活干擾素信號通路中調(diào)控原件ISRE,GAS和STAT3基因的表達(dá)。
研究結(jié)果表明,在軟體動物中存在干擾素分子,盡管氨基酸序列相似性低,但其生物學(xué)功能相對保守,干
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