1、隨著分子生物學的發(fā)展，利用基因工程技術進行小麥的遺傳改良，已成為育種研究的一個方向。再生體系和轉(zhuǎn)化體系的建立對基因工程育種具有重要意義。但小麥（Triticum aestivumL.）屬于異源六倍體植物,基因組龐大,重復序列多,再生能力差，遺傳轉(zhuǎn)化比較困難。本研究以小麥成熟胚為外植體，對影響再生的關鍵因素包括外植體類型及處理方式、植物激素種類和光照條件等進行了實驗，建立了穩(wěn)定的再生體系；并探索了農(nóng)桿菌介導小麥胚源愈傷組織的轉(zhuǎn)化條件，初步

2、建立了胚源愈傷組織的遺傳轉(zhuǎn)化過程；另外，本研究首次嘗試了以幼胚的生長點為受體，進行農(nóng)桿菌介導的直接轉(zhuǎn)化，初步確定了幼胚生長點直接轉(zhuǎn)化的可行性，以期為小麥轉(zhuǎn)基因育種提供理論依據(jù)及技術支持。
　　主要研究結果如下：
　?。?）以小麥成熟籽粒為起始材料，研究了外植體類型及處理方式、植物激素種類和光照條件等因素對小麥再生的影響。結果表明：①成熟胚的再生效率，優(yōu)于幼苗葉基切段，成熟胚的愈傷組織誘導率及再生率均高于幼苗葉基切段，且再生率

3、差異顯著；②完整胚在整個再生階段均表現(xiàn)較差，發(fā)芽率顯著高于切割胚，而愈傷誘導率和分化率又顯著低于切割胚；③附加2,4-D和Picloram均可以高頻率地誘導成熟胚愈傷組織的形成，但Picloram誘導形成的愈傷組織質(zhì)量較好，多為致密的淡黃色胚性愈傷組織，分化率高于2,4-D達2倍之多；④愈傷誘導階段光照培養(yǎng)，可以影響愈傷組織的質(zhì)量，提高分化率。成熟胚先黑暗培養(yǎng)14 d，再轉(zhuǎn)入光照條件下繼續(xù)誘愈培養(yǎng)，分化率顯著提高，可達22.84％。

4、r>　?。?）以Bobwhite成熟胚愈傷組織為受體，農(nóng)桿菌LBA4404（含
　　pCAMBIA3304-Tri101質(zhì)粒）為供體材料，研究了愈傷組織預培養(yǎng)時間、農(nóng)桿菌侵染時間和共培養(yǎng)方式對轉(zhuǎn)化效率的影響。結果表明：①隨著預培養(yǎng)時間的增加，GUS瞬時表達率增加，但愈傷組織的再生能力下降，當預培養(yǎng)時間為14 d時，愈傷組織的GUS瞬時表達率及再生能力均較好；②以OD600=1.0的農(nóng)桿菌重懸液，侵染處理3 h時，愈傷組織的GUS瞬

5、時表達率最高，在保證轉(zhuǎn)化率的前提下，再生能力較好；③在共培養(yǎng)階段進行干燥處理，可明顯提高愈傷組織的GUS瞬時表達率及再生能力。在三個處理中，均輔以組織再生相關基因的相對表達量分析，發(fā)現(xiàn)再生相關基因相對表達量的變化與愈傷組織的再生能力變化呈正相關。最終確定，小麥成熟胚預培養(yǎng)14 d后，農(nóng)桿菌侵染3 h，共培養(yǎng)階段經(jīng)干燥處理，是根癌農(nóng)桿菌介導成熟胚愈傷組織轉(zhuǎn)化的合適條件。
　?。?）以日齡1~3 d及7 d的小麥幼胚為受體，利用攜帶G

6、us基因的農(nóng)桿菌LBA4404侵染，恢復培養(yǎng)至3~5葉期時，取第三葉進行GUS組織化學染色分析；并做兩個優(yōu)化對比處理：①抽真空處理：在侵染過程中，0.1 MPa抽真空2 min；②干燥處理：在共培養(yǎng)階段，將幼胚轉(zhuǎn)入鋪有干燥無菌濾紙的平皿中。結果表明：GUS瞬時表達率隨日齡增加而降低，以2~3 d齡的幼胚為最高；抽真空和干燥處理均能顯著提高GUS瞬時表達率。最終，在優(yōu)化處理條件下，獲得77株轉(zhuǎn)化苗中，40株第三葉GUS染色顯示陽性，高達5