1、目的：煙曲霉誘導(dǎo)宿主細(xì)胞吞噬過程中磷脂酶D的激活及其功能研究
　　探討褪黑素(Melatonin,MT)與吉西他濱(Gemcitabine,GEM)對人胰腺癌SW1990裸鼠皮下移植瘤生長的影響及可能機制。
　　 方法：將對數(shù)生長期的人胰腺癌SW1990細(xì)胞注射在裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型,模型建立后將25只實驗裸鼠隨機分為五組,每組5只:(1)對照組(A組):腫瘤周圍皮下注射生理鹽水+腹腔注射生理鹽水；(2)MT低劑

2、量組(B組):腫瘤周圍皮下注射MT10mg/kg·d+腹腔注射生理鹽水；(3)MT高劑量組(C組):腫瘤周圍皮下注射MT20mg/kg·d+腹腔注射生理鹽水；(4)GEM組(D組):腫瘤周圍皮下注射生理鹽水+腹腔注射GEM50 mg/kg·d；(5)聯(lián)合干預(yù)組(E組):腫瘤周圍皮下注射MT20 mgag·d+GEM腹腔注射50mg/kg·d。所有裸鼠均為分組后當(dāng)日開始給藥,每日給藥一次。MT先用少量的無水酒精溶解后再用生理鹽水調(diào)整注射液

3、體量,每只約0.2ml,注射方式為腫瘤周圍皮下注射,一周內(nèi)連續(xù)注射四天,連續(xù)三周；GEM直接用生理鹽水溶解調(diào)整注射液體量,每只約1ml,注射方式為腹腔注射,每周第一天和第四天注射,連續(xù)三周。給藥后定期測量腫瘤大小,21天后處死裸鼠。測量各組皮下移植瘤的瘤體積、稱瘤重,計算抑瘤率,測定血清丙二醛(MDA)含量,MTT法測定脾臟NK細(xì)胞殺傷活性,RT-PCR檢測瘤組織VEGF、TGF-β1的表達(dá),并用免疫組化法測定瘤組織CaspaSe-3及

4、CaspaSe-9的表達(dá)。
　　 結(jié)果：25只裸鼠實驗期間無一只死亡,成瘤率100％。(1)與對照組的腫瘤體積(1.476±0.075)cm3相比,MT低劑量組(0.998±0.112)cm3、MT高劑量組(0.756±0.128)cm3、GEM組(0.746±0.115)cm3和聯(lián)合組(0.305±0.111)cm3腫瘤體積明顯減小(P<0.01),其中MT高劑量組腫瘤體積比低劑量組小(P<0.05),聯(lián)合組最小。(2)MT低

5、劑量組、MT高劑量組、吉西他濱組、聯(lián)合組抑瘤率分別為41.57％、58.62％、.59.27％、77.55％。(3)與對照組血清MDA含量(3.0868±0.1317)nmol/ml相比,MT低劑量組(2.5567±0.1600)nmol/ml,MT高劑量組(2.0874±0.1159)nmol/ml,聯(lián)合組(2.1007±0.0973)nmol/ml血清MDA含量明顯下降(P<0.01),MT高劑量組下降最明顯。(4)MT低劑量組、M

6、T高劑量組及聯(lián)合組NK細(xì)胞的殺傷活性分別為(44.27±3.19)％、(45.16±3.20)％、(30.29±2.91)％,與對照組(18.07±1.23)％比顯著增強(P<0.01)；吉西他濱單藥組NK細(xì)胞的殺傷活性(14.24±2.70)％與對照組比較明顯下降(P<0.05)。(5)MT低劑量組、MT高劑量組、吉西他濱組及聯(lián)合組VEGFmRNA的相對值分別為1.1367±0.0520、0.9925±0.3313、1.15524±0

7、.0680、0.6510±0.03946,明顯低于對照組1.3828±0.2342(P<0.01),MT高劑量組的表達(dá)低于低劑量組(P<0.05),且聯(lián)合干預(yù)組的表達(dá)最低(P<0.05)；TGF-β1mRNA的相對值,對照組為1.5169±0.1713,吉西他濱組為1.2343±0.0674,MT低劑量組為1.06464±0.4712,MT高劑量組為0.81444±0.1373,聯(lián)合組為0.5464±0.0559,所有藥物干預(yù)組的表達(dá)明

8、顯低于對照組(P<0.01),并且各干預(yù)組間表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(6)MT低劑量組、MT高劑量組、吉西他濱組及聯(lián)合組Caspase-3表達(dá)的陽性細(xì)胞指數(shù)分別38.26±2.75、42.23±5.52、61.81±5.47、75.74±3.96,明顯高于對照組6.55±1.53(P<0.01),并且各干預(yù)組間表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；MT低劑量組、MT高劑量組、吉西他濱組及聯(lián)合組Caspase-9表達(dá)的陽性細(xì)

9、胞指數(shù)分別33.74±3.22、45.99±3.17、52.96±3.49、81.05±6.76,明顯高于對照組10.25±1.42(P<0.01),并且各干預(yù)組之間相比均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：褪黑素能有效抑制裸鼠皮下移植性胰腺癌的生長,高劑量組的抑瘤效果較低劑量更為明顯,并且與吉西他濱聯(lián)合應(yīng)用,可顯著增加吉西他濱抑瘤效果。褪黑素抑制腫瘤生長的機制可能與其促進細(xì)胞凋亡,減少腫瘤血管的生成,增強宿主免疫功能,