抗高血壓大豆肽營養(yǎng)液的開發(fā)研究——抗高血壓肽的分離提純及體內(nèi)外活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文是在上屆論文確定的酶解條件基礎(chǔ)之上,將大豆蛋白酶解液進行預(yù)處理,上樣后通過單因素試驗確定凝膠過濾色譜最適分離條件,繪制分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線,并對分離液進行血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angioensin Converting Enzyme,簡稱ACE)體外抑制實驗,最終確定分離出的抑制活性高的組分的分子量范圍,完成降血壓肽的分離過程。在凝膠分離上采用SephadexG-25進行分組分離和SephadexG-15進行成分分離連續(xù)順次性的分離方法。本

2、論文還進行了自發(fā)性高血壓癥大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats,簡稱SHR)動物實驗,對酶解產(chǎn)物的穩(wěn)定性進行了研究。研究結(jié)果表明:
   確定了凝膠過濾色譜的最適分離條件。在分組分離中,SephadexG-25 Medium分離的最適條件為:上樣量5mL,酶解液2倍濃縮,洗脫流速2mL/6min,單管收集量2mL。后改用SephadexG-25 Super fine分組分離,其最適分離條件為:上樣

3、量5mL,酶解液2倍濃縮,洗脫流速2mL/7min,單管收集量2mL。進行組分分離,使用Sephadex G-15分離的最適分離條件為:上樣量2mL,分組分離樣4倍濃縮,洗脫流速2mL/8min,單管收集量2mL。
   繪制分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線并進行體外ACE抑制實驗。SephadexG-25 Medium分組分離的洗脫曲線將組分分成6組,效果最好組別的ACE抑制率為86.70%,分子量范圍為1440~780Da。之后改用Sepha

4、dexG-25 Super fine分組分離,對應(yīng)的最好組別ACE抑制率為92.78%,分子量范圍為1440~710Da,分離曲線得到很大程度的改善。使用SephadexG-15組分分離,分成6個洗脫峰確定抑制效果最好的為第3個洗脫峰,ACE抑制率為71.04%,分子量范圍為1060~790。分析其成分為8~10個左右氨基酸殘基的多肽。通過管數(shù)計算酶解產(chǎn)物的分離最終產(chǎn)率為4.55%。
   通過分離實驗和體外ACE抑制實驗發(fā)現(xiàn),

5、降血壓肽并不是集中在某一個肽段,其分子量分布在一個很廣的范圍內(nèi)均有ACE抑制活性,只是抑制率高低不同。
   SHR動物實驗表明:木瓜蛋白酶水解大豆分離蛋白1h的水解物的降血壓活性最高,SHR灌胃2h后血壓下降為18.4mmHg。酶解產(chǎn)物的穩(wěn)定性研究表明:樣品分別采用常溫和高溫殺菌處理,SHR灌胃2h后血壓分別下降了13.5mmHg和10.2mmHg;對樣品調(diào)酸后殺菌與不殺菌,SHR灌胃2h后血壓分別下降1~3mmHg和18mm

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