1、目的： 通過三氧化二砷(ArsenicTrioxide,ATO)對(duì)MRL/lpr狼瘡小鼠的免疫狀況及基因甲基化的研究，來探究該藥對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)的治療作用及進(jìn)一步探討其作用機(jī)制是否與其逆轉(zhuǎn)狼瘡小鼠基因低甲基化狀態(tài)有關(guān)。 方法： 將12周齡MRL/lpr狼瘡小鼠36只，隨機(jī)分為ATO組、5-氮胞苷(5-azacytidine,5-Aza)組及生理鹽水(

2、normalsaline,NS)組，ATO組隔日腹腔注射三氧化二砷0.4mg·kg-1·d-1，5-Aza組隔日腹腔注射5-氮胞苷0.6mg·kg-1·-1，NS組隔日腹腔注射生理鹽水0.3ml，總療程為60天。另設(shè)C57小鼠20只為對(duì)照，隨機(jī)分為ATO組和NS組，同樣隔日予以腹腔注射給藥。 1.抗dsDNA抗體水平的測(cè)定：治療前后留取血清用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)測(cè)定MRL/lpr狼瘡小鼠血清中抗dsDNA抗體水平。

3、 2.器官重量的測(cè)定：總療程結(jié)束后，處死小鼠并稱取其脾臟、胸腺、兩側(cè)腋窩及頸部淋巴結(jié)的重量。 3.DNA甲基化水平的檢測(cè)：用試劑盒抽提小鼠脾臟、淋巴結(jié)、胸腺、血液四種組織的DNA，然后用氫氟酸水解各個(gè)樣本的DNA，最后采用高效液相方法檢測(cè)MRL/lpr小鼠以上四種組織各個(gè)樣本的DNA甲基化水平。 4.血常規(guī)的測(cè)定：總療程結(jié)束后，將MRL/lpr與C57小鼠的眼球摘除，取抗凝血(用0.2％EDTA，以1:9抗凝)用于血

4、常規(guī)的檢測(cè)。 結(jié)果： 1.血清抗ds-DNA抗體水平： 治療前ATO組小鼠血清抗ds-DNA抗體(A450nm)為0.6210±0.0762，NS組為0.6161±0.1073，5-Aza組為0.6251±0.1243，三組相比無顯著性差異；治療后ATO組血清ds-DNA抗體為0.4987±0.0811，NS組為0.9911±0.1143，5-Aza組為1.1870±0.1331，ATO組較其他兩組均有明顯降低(

5、P＜0.01)。 2.治療后MRL/lpr小鼠免疫器官的重量： 治療后小鼠脾臟重量ATO組為0.6105±0.1812g，NS組為0.9146±0.4287g，5-Aza組為0.9342±0.4458g，總淋巴結(jié)重量ATO組為0.7592±0.2798g，NS組1.306±0.5794g，5-Aza組為1.213±0.5007g，ATO組脾臟及淋巴結(jié)重量較其他兩組明顯減輕(P＜0.0.5)。而胸腺的重量在三組之間無明顯差

6、異。 3.治療后MRL/lpr小鼠各臟器的DNA甲基化水平： 脾臟的甲基化水平，ATO組(3.78±0.81)％、NS組(2.16±0.42)％、5-Aza組(1.39±0.15)％；淋巴結(jié)的甲基化水平，ATO組(2.38±0.54)％，NS組(1.71±0.24)％，5-Aza組(1.19±0.15)％，ATO組脾臟及淋巴結(jié)的甲基化水平較NS組及5-Aza組明顯提高(P＜0.05)；而ATO組血液及胸腺的甲基化水平與N

7、S組相比，無明顯差異(P＞0.05)。 4.治療后各組小鼠的血常規(guī)： 白細(xì)胞ATO組為(10.27±2.03)x109/L，NS組(11.08±2.66)x109/L；紅細(xì)胞ATO組為(8.07±1.79)x1012/L，NS組為(8.76±0.87)x1012/L；血小板ATO組為(543.67±91.89)x109/L，NS組為(319.33±192.07)x109/L。白細(xì)胞及紅細(xì)胞兩組相比并無顯著性差異，ATO組

8、血小板較其他兩組有明顯的升高(P＜0.05)。而C57小鼠中沒有發(fā)現(xiàn)在ATO組及NS組中有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。 結(jié)論： 1.ATO抑制MRL/lpr狼瘡小鼠的抗dsDNA抗體生成，同時(shí)能抑制免疫器官的增生，減輕脾臟及淋巴結(jié)腫大。 2.ATO能提高M(jìn)RL/lpr狼瘡小鼠脾臟及淋巴結(jié)組織的DNA甲基化水平，由此推論，ATO可能通過提高狼瘡小鼠DNA甲基化水平，而抑制某些細(xì)胞因子及粘附分子的表達(dá)，從而達(dá)到抑制免疫并對(duì)SLE起治