1、目的：腹膜間皮細胞是構(gòu)成腹膜最主要的細胞群體，它在維持腹膜結(jié)構(gòu)的完整性和功能的有效性中起著重要的作用，腹膜結(jié)構(gòu)的完整與功能的穩(wěn)定是長期維持性腹膜透析(continuous ambulatory peritonealldialysis，cAPD)治療的基礎(chǔ)。長期腹膜透析治療可誘導(dǎo)腹膜間皮細胞損傷，進而促進腹膜纖維化的形成，最終導(dǎo)致腹透超濾失敗，從而迫使患者退出腹膜透析治療，因此CAPD相關(guān)腹膜纖維化的防治成為了當前國內(nèi)外學(xué)者研究的重點。本

2、研究擬探討高糖是否刺激體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細胞(human peritoneal mesothelial cells，HPMCs)發(fā)生氧化應(yīng)激損傷生成活性氧(reactive oxygen species，ROS)及對纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)表達的影響，同時應(yīng)用不同濃度的維生素E作為藥物對照來觀察其在HPMCs發(fā)生氧化應(yīng)激損傷下的保護作用，為腹膜纖維化的防治提供實驗依據(jù)。 方法：從CAPD治療的慢性腎臟病患者

3、腹膜透析流出液中分離并在含10﹪胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)人腹膜間皮細胞，第二代細胞應(yīng)用免疫組化方法進行細胞鑒定，第三代細胞用于實驗。分別按照不同的實驗要求分成濃度依賴組、藥物干預(yù)組。采用ELISA法檢測HPMCs上清液中FN蛋白水平，采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)半定量分析HPMCs中FNmRNA的基因表達，同時應(yīng)用流式細胞儀檢測細胞內(nèi)對氧化劑敏感的2，7-二氫二氯熒光素(DCFH)發(fā)生氧化所產(chǎn)生的熒光量，

4、從而間接的反映細胞內(nèi)ROS的水平。分別用三種不同濃度的抗氧化劑維生素E(12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)預(yù)處理細胞，觀察其對HPMCs內(nèi)源性ROS生成及FN表達的影響。 1.高糖能顯著誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細胞FN的分泌與基因表達，呈濃度依賴方式(P<0.01)，其中4.25﹪葡萄糖組(高糖組)誘導(dǎo)人腹膜間皮細胞FN的分泌與基因表達更加明顯。 2.高糖可明顯刺激體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細胞內(nèi)活性氧

5、(ROS)的生成，呈濃度依賴方式(P<0.01)，在30min測定平均熒光強度，其中4.25﹪葡萄糖組(高糖組)刺激人腹膜間皮細胞ROS生成量最高。 3.分別用三種不同濃度的抗氧化劑維生索E預(yù)處理細胞，與空白對照組相比，可明顯地降低細胞內(nèi)ROS的生成量，同時顯著地抑制FN的分泌與基因表達，呈劑量依賴方式(P<0.01)，其中維生素E(50μmol/L)組抑制更加明顯。 結(jié)論： 1.高糖可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細