1、紅車軸草(Trifolium pratense L.)為豆科多年生草本植物，是我國主要的牧草植物之一。紅車軸草含有黃酮類、蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類和維生素等多種成分，其中黃酮類物質(zhì)總含量約占干重的2％。黃酮類物質(zhì)中的異黃酮主要是鷹嘴豆芽素A(Biochanin A)、芒柄花素(Formononetin)、染料木素(Genistein)和大豆黃素(Daidzein)等4種，研究證明紅車軸草異黃酮具有弱的雌激素樣作用和促進動物生長、抑制癌細胞的

2、生長及改善動脈血管的柔軟性等多種生理功能，但對其抗氧化活性及對機體免疫功能的影響研究較少。因此，本實驗對紅車軸草總黃酮的抗氧化作用以及對機體免疫功能的影響進行了研究。 應用超聲一微波協(xié)同萃取技術，用80％乙醇做溶媒，提取紅車軸草總黃酮。采用Fenton反應產(chǎn)生羥自由基(·OH)、鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)模型，檢測紅車軸草總黃酮體外清除自由基的作用；采用分光光度法測定H2O2誘導紅細胞溶血作用，用硫代巴比妥酸(TBA

3、)法測定小鼠紅細胞膜脂質(zhì)及肝組織勻漿脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量；通過遲發(fā)變態(tài)反應試驗、炭粒廓清試驗、免疫器官臟器指數(shù)試驗研究紅車軸草總黃酮對小鼠免疫功能的影響。研究結(jié)果如下： 1.紅車軸草總黃酮在6.25～200 mg/mL范圍內(nèi)具有清除Fenton反應產(chǎn)生·OH的作用，在6.25～100 mg/mL濃度范圍內(nèi)對鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的O2-具有清除作用，直線回歸方程分別為Y=18.699+0.395X(r2=0.843)，

4、Y=13.82+0.663X(r2=0.997)，表明二者均呈明顯的量效關系，其對·OH(IC50)和對O2-半數(shù)清除濃度(IC50)分別為44.06 mg/mL和54.57mg/mL。表明紅車軸草總黃酮體外具有較好的清除自由基作用。 2.紅車軸草總黃酮在0.025～0.2 mg/mL范圍內(nèi)能抑制H2O2誘導紅細胞溶血和紅細胞膜脂質(zhì)過氧化作用，直線回歸方程分別為Y=12.393+322.661X(P<0.05，r=0.970，r

5、2=0.942)、Y=21.284+249.84.7X(r=0.989，r2=0.978)，IC50分別為0.0910 mg/mL和0.0905 mg/mL，均表現(xiàn)較好的量效關系；紅車軸草總黃酮在0.10～0.78 mg/mL范圍內(nèi)可以抑制肝組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的形成，曲線擬合Y=76.472-4.628/X(r2=0.990)，IC50為0.174 mg/mL。表明紅車軸草總黃酮體外具有明顯的抗氧化作用。 3.以小鼠遲發(fā)變態(tài)反應

6、試驗、炭粒廓清試驗、免疫器官臟器指數(shù)試驗，測定紅車軸草總黃酮對免疫功能的影響。結(jié)果表明，隨著紅車軸草總黃酮濃度的增大，小鼠足跖增厚逐漸增加，與對照組比以50 mg/mL濃度組增加顯著(p<0.05)；小鼠炭粒廓清試驗表明，50 mg/ml和20 mg/ml濃度組與對照組比較均能顯著增強小鼠炭粒廓清能力(P<0.05)；脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)隨著紅車軸草總黃酮濃度的增大有增加的趨勢，但沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。說明紅車軸草總黃酮在適宜濃