1、目的：半導(dǎo)體量子點(Semiconductor quantum dots，QDs)作為一種新型的納米材料，由于具有獨特的光譜特性和良好的光化學(xué)穩(wěn)定性，它提供了對活細(xì)胞成像和對活細(xì)胞內(nèi)分子進(jìn)行長期追蹤觀察研究的可能，但用量子點標(biāo)記癌細(xì)胞后是否影響其生物學(xué)行為是量子點能否用于腫瘤活細(xì)胞可視化研究的關(guān)鍵所在。本課題利用半導(dǎo)體量子點[CdSe/ZnS]標(biāo)記舌鱗癌細(xì)胞Tca8113，觀察被量子點標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞其生長、浸潤、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)

2、行為的改變情況，為半導(dǎo)體量子點用于活體腫瘤細(xì)胞的實時原位“在線”研究提供依據(jù)。 方法：首先在激光共聚焦顯微鏡(confocal microscopy，CM)下觀察量子點的發(fā)光顏色，發(fā)光強(qiáng)度和形態(tài)，將Tca8113細(xì)胞接種在24孔培養(yǎng)板內(nèi)，細(xì)胞貼壁后加入量子點共同培養(yǎng)，然后在相差倒置熒光顯微鏡(fluorescence microscope，F(xiàn)M)下觀察量子點進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的情況。將生長旺盛的Tca8113細(xì)胞，加入不同高濃度(0.1

3、μMol，1μMol，2μMol)的半導(dǎo)體量子點[CdSe/ZnS]，觀察Tca8113細(xì)胞生長的情況，繪制細(xì)胞生長曲線。檢測量子點標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞對其生物學(xué)行為的影響，包括：細(xì)胞侵襲重建基底膜實驗在transwell小室中進(jìn)行，將穿膜細(xì)胞的平均數(shù)來表示腫瘤細(xì)胞的侵襲能力；Hank’s液輕洗2遍收集未粘附細(xì)胞計數(shù)，每時間點隨機(jī)取3孔求平均值，計算不同時間的粘附率。聚碳酸多孔濾膜表面未鋪matrigel，其余步驟和方法與侵襲實驗相

4、同，以穿膜細(xì)胞的平均數(shù)來表示腫瘤細(xì)胞的趨化運動能力。 結(jié)果：在激光共聚焦顯微鏡下量子點為接近圓型的橢圓紅色熒光體，最大發(fā)射波長為605nm，熒光強(qiáng)度為250。加入量子點40分鐘可見量子點開始進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，80分鐘細(xì)胞內(nèi)已有較多的量子點，120分鐘已有大量的量子點進(jìn)入細(xì)胞，量子點主要分布在胞漿內(nèi)。對照組和不同濃度量子點標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞在各個時間點生長曲線基本一致。用量子點標(biāo)記的Tca8113/QDs細(xì)胞和未標(biāo)記的Tca811

5、3細(xì)胞，其穿膜細(xì)胞均數(shù)分別為74.6±3.2、76.5±2.8，兩均數(shù)間無顯著差異(P>0.05)。在同一個時間點(30min、60min、90min、120min)量子點標(biāo)記的Tca8113/QDs細(xì)胞和未標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞的粘附率沒有顯著性差別，說明經(jīng)量子點標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞其粘附能力未發(fā)生改變。量子點標(biāo)記的Tca8113/QDs細(xì)胞和未標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞侵襲至濾膜下表面的細(xì)胞數(shù)目分別為83.8±4.1、85.4

6、±3.7，兩均數(shù)間無顯著差異(P>0.05)，說明經(jīng)量子點標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞未影響其趨化運動能力。 結(jié)論：量子點能夠以內(nèi)吞方式進(jìn)入Tca8113活細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)行細(xì)胞成像，從而可用來進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記，作為活細(xì)胞內(nèi)的標(biāo)記物進(jìn)行顯像奠定了基礎(chǔ)。量子點在激光共聚焦顯微鏡下量子點表現(xiàn)為接近圓型的橢圓紅色熒光體，最大發(fā)射波長為605nm，熒光強(qiáng)度為250。在Tca8113活細(xì)胞中，量子點主要分布在胞漿內(nèi)。不同濃度量子點(0

7、.1μMol，1μMol，2μMol)標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞對Tca8113細(xì)胞的生長沒有影響。經(jīng)量子點標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞的侵襲能力和趨化運動能力沒有影響。在同一個時間點(30min、60min、90min、120min)Tca8113/QDs和Tca8113細(xì)胞的粘附率沒有顯著性差異。本實驗證明了在Tca8113細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記高密度的[CdSe/ZnS]量子點后對癌細(xì)胞的侵襲、粘附及趨化運動能力等生物學(xué)行為沒有影響，為建立基于半