1、本文在參考Arregui等報(bào)道的方法的基礎(chǔ)上，對(duì)熒光紫杉醇染色(FLUTAX)顯示纖毛蟲(chóng)細(xì)胞微管胞器的流程進(jìn)行了改進(jìn)，對(duì)其中一些試劑的配方作了調(diào)整，改進(jìn)了多聚賴氨酸涂布玻片、皂苷孵育、多聚甲醛固定和TritonX-100滲透等步驟。按照改良的FLUTAX染色方法，以FLUTAX為探針跟蹤標(biāo)記了一種腹毛類纖毛蟲(chóng)游仆蟲(chóng)(Euplotessp.)的微管胞器和相關(guān)的結(jié)構(gòu)微管的形態(tài)及其在生命周期不同時(shí)期的變化。無(wú)性生殖過(guò)程中，腹部纖毛器包括口圍帶

2、、波動(dòng)膜、額腹橫棘毛和尾棘毛發(fā)生瓦解，新纖毛器在細(xì)胞皮層的特定位置發(fā)生，從相應(yīng)纖毛器原基的發(fā)生、組排和遷移，至最終形成前、后兩套新的纖毛器，新結(jié)構(gòu)的形成和老結(jié)構(gòu)的瓦解是一個(gè)相伴隨的過(guò)程。背面纖毛器的發(fā)生中，新纖毛原基在老纖毛基體后發(fā)生，最終形成前、后兩套新背纖毛。根據(jù)游仆蟲(chóng)在無(wú)性生殖過(guò)程中微管胞器的分化特征，推測(cè)，微管胞器在纖毛蟲(chóng)生命活動(dòng)不同時(shí)期發(fā)生了連續(xù)的變化，是細(xì)胞生命活動(dòng)中的至關(guān)重要的結(jié)構(gòu)；在形態(tài)發(fā)生和結(jié)構(gòu)分化的過(guò)程中，先存微管結(jié)

3、構(gòu)對(duì)新結(jié)構(gòu)的形成可能有物質(zhì)貢獻(xiàn)，并且具有結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)和模式定位的作用。 應(yīng)用α微管蛋白抗體和γ微管蛋白抗體標(biāo)記不同時(shí)期游仆蟲(chóng)微管胞器的發(fā)生過(guò)程。α微管蛋白抗體具有較強(qiáng)的特異性，與游仆蟲(chóng)胞器及骨架中的α微管蛋白特異性結(jié)合，跟蹤標(biāo)記了游仆蟲(chóng)在細(xì)胞間期和分裂期的纖毛器骨架及胞器微管的發(fā)生、遷移、定位。間期細(xì)胞除其基體胞器被標(biāo)記，在游仆蟲(chóng)背部可見(jiàn)明顯的皮層網(wǎng)格和背觸毛外，還發(fā)現(xiàn)細(xì)胞腹部和背部均被較細(xì)的縱向纖維包裹，構(gòu)成較復(fù)雜的纖維網(wǎng)絡(luò)。細(xì)胞

4、分裂期，游仆蟲(chóng)腹部棘毛從產(chǎn)生原基到新纖毛器成熟直至遷移定位，這一系列過(guò)程似乎都與老纖毛器及其基體有著密切聯(lián)系；背觸毛的發(fā)生可能是在老背觸毛基體的指導(dǎo)下完成的，老背觸毛可能起了模板作用。γ微管蛋白抗體應(yīng)特異地與γ微管蛋白結(jié)合，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該抗體特異性不高，標(biāo)記不明顯，推測(cè)與γ微管蛋白抗體本身特異性不強(qiáng)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的抗體為鼠源抗體，可能是種屬差異太大，導(dǎo)致特異性不高。 此外，利用三種微管蛋白抗體分析游仆蟲(chóng)微管蛋白的主要成分：

5、α微管蛋白、β微管蛋白和γ微管蛋白。本實(shí)驗(yàn)中用到的一抗包括：鼠抗α微管蛋白抗體(Sigma)，鼠抗β微管蛋白抗體(Sigma)，鼠抗γ微管蛋白抗體(Sigma)和兔抗γ微管蛋白抗體(Abcam)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：α、β微管蛋白分子量均為55KD左右，在游仆蟲(chóng)體內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，且與抗體結(jié)合特異性較好；兩種γ微管蛋白抗體對(duì)游仆蟲(chóng)體內(nèi)的γ微管蛋白標(biāo)記都不是很清晰，其中，SIGAMA抗體標(biāo)記較弱，幾乎看不到明顯的目的條帶，而ABCAM的抗體非特異性條