1、蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是生命科學(xué)的重要研究對象。蛋白質(zhì)與小分子物質(zhì)之間的相互作用研究有助于考察蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能與小分子配體的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)之間存在的相關(guān)性，并已成為生命科學(xué)、化學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的重要研究課題。本論文采用流動注射-化學(xué)發(fā)光法，以溶菌酶、牛血清白蛋白、過氧化氫酶和肌紅蛋白對化學(xué)發(fā)光試劑魯米諾的增敏作用為基礎(chǔ)，分別建立了魯米諾-溶菌酶、魯米諾-牛血清白蛋白、魯米諾-過氧化氫酶和魯米諾-肌紅蛋白穩(wěn)態(tài)化學(xué)發(fā)光體系；以溶菌酶和牛

2、血清白蛋白為模型蛋白，探討了蛋白質(zhì)與頭孢菌素之間的相互作用并做了富有創(chuàng)新性的研究工作，首次建立了蛋白質(zhì)-藥物相互作用的流動注射-化學(xué)發(fā)光法模型，并且成功用于四種模型蛋白與頭孢菌素等藥物相互作用及分析應(yīng)用研究。論文內(nèi)容分為兩部分：
　　 第一部分綜述
　　 總結(jié)了分子光譜法進展及其應(yīng)用于研究蛋白質(zhì)與小分子物質(zhì)相互作用的現(xiàn)狀，引用文獻282篇(第一章)。
　　 第二部分研究報告：1.蛋白質(zhì)-藥物相互作用的流動注射-化

3、學(xué)發(fā)光法模型的構(gòu)建。溶菌酶(或牛血清白蛋白)與魯米諾在線生成1:1的二元復(fù)合物，能夠增強魯米諾化學(xué)發(fā)光，以此建立了穩(wěn)態(tài)的魯米諾-溶菌酶(或魯米諾-牛血清白蛋白)化學(xué)發(fā)光體系；以頭孢菌素與魯米諾-溶菌酶(或魯米諾-牛血清白蛋白)的相互作用生成1:1:1三元復(fù)合物并能猝滅魯米諾-溶菌酶(或魯米諾-牛血清白蛋白)化學(xué)發(fā)光為基礎(chǔ)，構(gòu)建了蛋白質(zhì)-藥物相互作用的流動注射-化學(xué)發(fā)光法模型并推導(dǎo)出計算作用參數(shù)的公式：lg(I0-I)/I=lgKD+nl

4、g[D](第二、三章)。
　　 2.蛋白質(zhì)-藥物相互作用的流動注射-化學(xué)發(fā)光法模型的應(yīng)用。運用本論文建立的蛋白質(zhì)-藥物相互作用模型，獲得了溶菌酶-頭孢菌素和牛血清白蛋白-頭孢菌素的作用參數(shù)，同時用熒光猝滅法進行了驗證，兩種方法得到的結(jié)果基本一致。大部分頭孢菌素類藥物與蛋白相互作用的結(jié)合常數(shù)KD均在103-105水平，表明該類藥物與溶菌酶或牛血清白蛋白之間存在較強相互作用。結(jié)合能力大小遵循以下順序：頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢噻肟＞頭

5、孢呋辛、頭孢克洛＞頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉，表明隨著藥物代次的升高，藥物與蛋白質(zhì)之間結(jié)合越來越強。結(jié)合位點數(shù)n約為1.0，表明頭孢菌素在溶菌酶或牛血清白蛋白分子中的結(jié)合位點都是一個，并可能位于溶菌酶分子中Trp62或牛血清白蛋白分子中Trp212氨基酸殘基附近。熱力學(xué)參數(shù)均為：ΔG＜0，ΔH＞0，ΔS＞0，表明溶菌酶或牛血清白蛋白同頭孢菌素藥物相互作用形成復(fù)合物的過程是自發(fā)進行的，并主要以疏水作用力相結(jié)合(第二、三章)。頭孢菌素藥

6、物與過氧化氫酶能夠發(fā)生相互作用，對魯米諾-過氧化氫酶體系的化學(xué)發(fā)光有猝滅作用，據(jù)此運用流動注射-發(fā)學(xué)發(fā)光法研究了過氧化氫酶與頭孢菌素的相互作用。運用蛋白質(zhì)-藥物作用模型，計算了過氧化氫酶與頭孢菌素相互作用的的結(jié)合常數(shù)及結(jié)合位點數(shù)。除第一代頭孢菌素外，二、三代藥物與過氧化氫酶的結(jié)合常數(shù)KD均在104-105水平，表明它們之間存在強的親合作用；結(jié)合位點數(shù)n約為1.0，表明藥物在過氧化氫酶分子中有一個結(jié)合位點。本方法還成功用于口服頭孢拉定膠囊

7、中的藥物含量測定和人體尿液中頭孢拉定的監(jiān)測，口服500.0mg頭孢拉定后，2小時后頭孢拉定的排出量達到最大值，8小時內(nèi)總代謝率為79.51％，計算得到頭孢拉定總的代謝常數(shù)(K)和半衰期(t1/2)分別為0.4822和1.45(第四章)?；隰斆字Z-肌紅蛋白體系強烈的化學(xué)發(fā)光能被頭孢菌素藥物抑制，運用流動注射-化學(xué)發(fā)光法研究了肌紅蛋白與頭孢菌素藥物的相互作用，獲得了作用參數(shù)。本方法也應(yīng)用于頭孢克洛膠囊中的含量測定及口服頭孢克洛后人體尿液中

8、代謝狀況監(jiān)測。藥物含量測定的回收率范圍為93.0％-106.5％，測定值與標示量接近；尿液監(jiān)測的結(jié)果為1.5小時頭孢克洛的排出量達到最大值，8小時內(nèi)總代謝率為51.75％，總的代謝常數(shù)(K)和半衰期(t1/2)分別為0.8063和0.86(第五章)。應(yīng)用魯米諾-肌紅蛋白化學(xué)發(fā)光體系，研究了肌紅蛋白與三聚氰胺的相互作用，建立了測定納克級三聚氰胺的化學(xué)發(fā)光分析方法。魯米諾-肌紅蛋白體系化學(xué)發(fā)光強度的減小值與三聚氰胺濃度的對數(shù)值在0.01ng

9、mL-1-50ngmL-1的范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢出限為3pgmL-1(3σ)，測定的相對標準偏差小于3.0％(n=7)。該方法已經(jīng)成功應(yīng)用于測定乳制品中的三聚氰胺，回收率為93.4-106.5％(第六章)。以氯雷他定對魯米諾-肌紅蛋白體系化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的抑制作用為基礎(chǔ)，研究了肌紅蛋白和氯雷他定的相互作用，建立了測定氯雷他定的化學(xué)發(fā)光分析方法。氯雷他定濃度的對數(shù)值與化學(xué)發(fā)光強度降低值成線性關(guān)系，線性濃度范圍為0.1ngmL-1-10