1、華重樓(Paris polyphylla Var.chinensis Franch)為延齡草科(Trilliaceae)重樓屬植物，是一種多年生草本名貴中藥，具有清熱解毒，消腫止痛，涼肝定驚等功效，主要用于疔瘡癰腫，咽喉腫痛，蛇蟲(chóng)咬傷，跌撲傷痛，驚風(fēng)抽搐等病癥，被《中國(guó)藥典》（2010年版）收錄。現(xiàn)代藥理研究表明，重樓具有止血止痛、抗菌抗癌、祛痰鎮(zhèn)靜，因此成為了云南白藥、抗病毒顆粒、宮血寧膠囊等多種中成藥的主要成分。然而由于重樓自然生長(zhǎng)

2、緩慢，從種子萌發(fā)到成熟收獲需要8-10年的時(shí)間，加之人工種植技術(shù)尚未成熟，暫時(shí)還沒(méi)有大規(guī)模的開(kāi)發(fā)和利用，重樓生物量整體上面臨著短缺;更由于市場(chǎng)需求的巨大利益誘惑，大量的野生資源被農(nóng)戶(hù)采挖，讓野生重樓資源日漸枯竭。所以尋找重樓的替代品和開(kāi)發(fā)人工種植技術(shù)成為了目前研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。參考國(guó)內(nèi)外的研究文獻(xiàn)，植物內(nèi)生菌能夠產(chǎn)出與宿主相同或者相似的具有一定生理活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，而從菌類(lèi)中提取有用的代謝產(chǎn)物是進(jìn)行工廠化規(guī)?；a(chǎn)的最好途徑。本文以四

3、川邛崍山脈的華重樓內(nèi)生菌為研究材料，尋找可以產(chǎn)生甾體皂苷或者類(lèi)似物的菌種，首先從實(shí)驗(yàn)室的層面發(fā)現(xiàn)和解決重樓資源不足的問(wèn)題。
　　從四川都江堰市、寶興縣、雨城區(qū)、名山縣、天全縣采集新鮮的人工栽培華重樓，利用組織切塊法進(jìn)行內(nèi)生真菌和內(nèi)生細(xì)菌的分離、純化和鑒定。共分離內(nèi)生真菌83株，純化52株，ITS分子鑒定出26株，分為7個(gè)屬;分離內(nèi)生細(xì)菌101株，純化48株，16 SrDNA分子鑒定出35株，分為16個(gè)屬。對(duì)內(nèi)生菌的進(jìn)行發(fā)酵液超聲波

4、破碎、萃取、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后HPLC檢測(cè)，同重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及薯蕷皂苷元的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)4株真菌（DJY-10、DJY-7、MS-9、BX-15）和3株細(xì)菌（BX-9、YC-3、MS-6）至少有1個(gè)和標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間相近，其中DJY-7、MS-9、BX-15、YC-3和重樓皂苷Ⅰ的出峰時(shí)間相近，YC-3和重樓皂苷Ⅱ的出峰時(shí)間相近，BX-15、YC-3、MS-6和重樓皂苷Ⅵ的出峰時(shí)間相近，BX-15和重樓皂苷Ⅶ的出峰時(shí)間相近，7

5、株內(nèi)生菌都和薯蕷皂苷元的出峰時(shí)間相近。而真菌BX-15和細(xì)菌YC-3都和5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的其中4個(gè)有相近的出峰時(shí)間，這可能成為利用內(nèi)生菌進(jìn)行重樓替代生產(chǎn)的優(yōu)良菌株。
　　根據(jù)分子鑒定結(jié)果，DJY-10和MS-9為尖胞鐮刀屬、DJY-7為木霉屬、BX-9為蒼白桿菌屬、YC-3為芽孢桿菌屬、MS-6為綠膿假單胞菌屬，BX-15由于在測(cè)序過(guò)程中出現(xiàn)了結(jié)合問(wèn)題尚未鑒定出。在鐮刀屬、芽孢桿菌屬和假單胞菌屬中已有研究發(fā)現(xiàn)了可以產(chǎn)甾體皂苷的重樓內(nèi)生菌