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文檔簡介
1、高等植物莖端分生組織的調控是一個復雜而精細的過程,WUS是莖尖干細胞決定基因,與莖端分生組織干細胞的發(fā)生和維持都密切相關。本論文就前人還沒有研究過的WUS蛋白的泛素化過程及其相互作用蛋白展開研究。
首先本實驗建立了離體的蛋白分析系統(tǒng),將純化的WUS蛋白加入擬南芥幼苗的無細胞提取液中反應,然后檢測其水平的變化,結果證明WUS蛋白在無細胞提取液中被逐漸降解,并且這種降解不能被廣譜型蛋白酶抑制劑PMSF抑制,卻可以被適當濃度的蛋白酶
2、體抑制劑MG132、ALLN抑制。用蛋白酶體抑制劑來處理超表達WUS的轉基因幼苗,發(fā)現(xiàn)經(jīng)處理后其體內(nèi)原本水平很低的WUS蛋白顯著升高,得到與離體實驗一致的結果,表明超表達WUS的轉基因植株中的WUS蛋白通過泛素蛋白酶體途徑被降解了。為了找到介導WUS蛋白泛素化的E3連接酶,本實驗又建立了WUS蛋白的酵母雙雜交系統(tǒng),以WUS蛋白作為誘餌蛋白,在擬南芥cDNA文庫中找到了多個與其可能存在相互作用的蛋白質,這些蛋白的發(fā)現(xiàn)為進一步研究WUS蛋白
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