1、背景和目的
　　 先天性巨結(jié)腸癥又稱為赫希施普龍病(Hirschsprung's disease,HD)是一種比較常見(jiàn)的小兒消化道發(fā)育畸形,屬于一種先天性疾病。發(fā)病率約為1/5000,存在一定的性別差異,男女比例約為4:1。HD是造成結(jié)腸腸管增粗的原因之一,可發(fā)生在近端結(jié)腸,主要位于乙狀結(jié)腸和部分降結(jié)腸;也可發(fā)生在直腸和遠(yuǎn)端乙狀結(jié)腸;HD患兒結(jié)腸狹窄段和擴(kuò)張段兩部分結(jié)腸組織之間有一過(guò)渡或移形區(qū),往往呈漏斗形,長(zhǎng)約3cm-8cm不

2、等。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)了轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白在整個(gè)腸神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中存在。近年來(lái)NKX2-1的研究主要集中在甲狀腺、腦及肺組織等有關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育疾病過(guò)程的研究中,在腸神經(jīng)系統(tǒng)的研究比較少。先天性巨結(jié)腸患兒的腸蠕動(dòng)功能可能與轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白在HD患兒腸管管壁中的表達(dá)存在一定的相關(guān)性,本次實(shí)驗(yàn)的目的是應(yīng)用免疫組化SP法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)定性和定量測(cè)定轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸壁中的表達(dá),以便更

3、加深入的了解HD在分子基礎(chǔ)上的確切發(fā)病機(jī)制,為HD疾病的臨床診斷提供可靠的參考。
　　 材料和方法
　　 1應(yīng)用免疫組化SP法觀察30例HD手術(shù)切除標(biāo)本(分別取HD患兒狹窄段、移行段、擴(kuò)張段結(jié)腸壁全層組織)同時(shí)取30例腸套疊患兒手術(shù)切除并具備神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的全層結(jié)腸組織做為對(duì)照組,觀察各組織標(biāo)本中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸壁中的表達(dá)情況;
　　 2應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測(cè)30例新鮮的HD手術(shù)切除標(biāo)本

4、(包括HD患兒狹窄段、移行段、擴(kuò)張段全層結(jié)腸組織)和30例腸套疊患兒手術(shù)切除的存在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的全層結(jié)腸組織做對(duì)照組,觀察轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸組織中的表達(dá)情況:
　　 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0軟件處理,HD患兒各組結(jié)腸組織和正常對(duì)照組結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白表達(dá)的比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn);HD患兒各組結(jié)腸組織和正常對(duì)照組結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1mRNA表達(dá)的比較采用兩個(gè)獨(dú)立

5、樣本的t檢驗(yàn)或校正t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。
　　 結(jié)果
　　 1轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1在巨結(jié)腸患兒窄段結(jié)腸組織中表達(dá)明顯減少,在擴(kuò)張段結(jié)腸組織中表達(dá)正常,在移行段中的表達(dá)處于二者之間。
　　 2 HD患兒狹窄、移行段結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白和mRNA表達(dá)與正常對(duì)照組結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白的mRNA表達(dá)進(jìn)行比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.236和2.926,P＜0.008;t'=1

6、9.475和14.429,P＜0.05),HD患兒擴(kuò)張段結(jié)腸組織和對(duì)照正常結(jié)腸組織中NKX2-1蛋白和mRNA的表達(dá)比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=2.336,P=0.019＞0.008;t=0.985,P=0.329＞0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1 HD患兒狹窄段結(jié)腸壁組織中缺少轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因的表達(dá)可能是HD發(fā)病的基本病理改變之一。
　　 2轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸組織中表達(dá)減少可能是導(dǎo)