1、臨床上，按常規(guī)的細胞遺傳學方法(核型分析)，約有一半的急性髓細胞白血病(AML)在初診時檢測不到克隆性的染色體數(shù)量異常和/或結(jié)構畸變，稱之為正常核型AML(nk-AML)，目前尚缺乏明確的分子致病機制和治療靶點，如何診斷該類患者，判斷其療效和預后以及開發(fā)新的分子靶向藥物是AML研究的主要問題。 急性粒單核(AML-M4)和單核細胞白血病(AML-M5)是一類缺乏特異性染色體異常且預后較差的患者，論文的第一部分選取了13個粒單核分

2、化中起重要作用的造血調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子，信號轉(zhuǎn)導分子，造血生長因子受體如VDR,Egr-1,ICSBP,c-Jun.PU.1.c-fms,TGFβ1,TGFβRII,MafB,TRAP220,α-adaptin,NPM1，MLL等，在核型正常的小樣本AML-M4和M5骨髓樣本中通過直接測序的方法篩查基因的編碼區(qū)和/或5’調(diào)控區(qū)域，發(fā)現(xiàn)VDR,MLL和NPM1基因存在較高頻率的遺傳變異。其中，VDR基因羧基末端由于38個堿基缺失導致編碼提前終止

3、Ala303ValfsX12；MLL基因檢測中，22％的患者缺失MLL基因第8外顯子，40％的患者缺失第10外顯子，分別導致Pro1339LysfsX7和Glu1407_Glu1444del，其中第8外顯子的缺失導致包括MLL基因PHD結(jié)構域在內(nèi)的羧基末端丟失。取8例正常對照cDNA進行測序比對，發(fā)現(xiàn)正常個體中也存在高頻的VDR基因堿基缺失，MLL基因第8和第10外顯子的缺失。雖然缺失所導致的功能變化還有待進一步探討，但猜測這些堿基缺失

4、所致的編碼改變可能來自基因不同的選擇性剪切轉(zhuǎn)錄本。NPM1突變在AML中的發(fā)生頻率為23.5％，在核型正?；颊咧械念l率為36％，突變中的90％來自于M4和M5患者，提示NPM1突變在這些類型白血病的發(fā)生機制中有著重要作用。 多數(shù)人類白血病，包括急性髓系白血病具有染色體基因組不穩(wěn)定的特征，如染色體易位、缺失、倒位等，與白血病的發(fā)生、分類、治療和預后具有密切的聯(lián)系。DNA雙鏈斷裂的產(chǎn)生和不正確修復是導致DNA重組和變異的原因之一，D

5、NA修復功能的異常還可以使腫瘤細胞對抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性。論文的第二部分針對修復途徑中的一些重要基因，結(jié)合SNP數(shù)據(jù)庫和突變報道，對16個基因總共44個SNP或突變在580例血液腫瘤標本和500例正常對照組間通過MassARRAY質(zhì)譜系統(tǒng)進行基因型分析。病例一對照組間雖未找到與疾病發(fā)生相關的SNP，但在患者預后數(shù)據(jù)分析中發(fā)現(xiàn)ATMH1380Y基因型與化療療效具有相關性(P＜0.05)，ATM4138CT基因型患者療效較差，總體生存期也較A

6、TM4138CC基因型患者明顯縮短(P=0.028)。 AML的分子發(fā)病機制，通常認為由兩類突變或基因重排共同作用引起，最終通過抑癌基因的失活，癌基因的激活等途徑導致腫瘤發(fā)生。目前認為，抑癌基因失活方式除了基因突變和基因缺失外，甲基化已經(jīng)成為抑制其功能的第三種機制。論文第三部分結(jié)合甲基化特異性PCR(MSP)，重亞硫酸鹽測序PCR(BSP)方法和質(zhì)譜檢測方法對113例急性髓細胞白血病患者(除M3)進行DNA甲基化分析，首次在血液

7、腫瘤中發(fā)現(xiàn)信號傳導通路中的兩個重要基因RGS2和EGR2的調(diào)控區(qū)域存在較高比例甲基化(～30％)，而在正常對照中未檢測到相關甲基化。定量RT-PCR證實其表達較非甲基化患者樣本明顯降低(P＜0.05)。比較這兩組患者的療效預后，發(fā)現(xiàn)甲基化組的總體生存期明顯短于非甲基化組(P＜0.001)，且兩個基因同時發(fā)生甲基化的患者比單一基因甲基化組預后更差(P＜0.05)。提示RGS2基因和EGR2基因的甲基化在白血病發(fā)生、預后提示方面都有著重要意