1、目的與意義:癲癇(EP)是神經(jīng)系統(tǒng)常見的慢性疾病，病程長且反復發(fā)作。流行病學表示，在世界范圍內(nèi)癲癇患者約占1％，而我國每年癲癇的發(fā)病率約23/10萬左右，估計現(xiàn)有癲癇病人約455萬～630萬人。現(xiàn)階段臨床上對癲癇的治療仍以口服抗癲癇藥物為主?，F(xiàn)代抗癲癇藥物(AEDS)都是人工合成的化學性藥物，目前可控制約80％患者的癲癇發(fā)作，但患者需要長期甚至終身服藥治療。然而化學合成藥物不可避免其毒副作用，多數(shù)AEDS會對神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及血液系統(tǒng)

2、產(chǎn)生不良影響，患者可能會出現(xiàn)頭暈、乏力、惡心、嘔吐以及血小板減少等一系列癥狀。再者，隨著服藥時間的增長，多數(shù)患者耐藥性不斷提高，只能加大藥物劑量或者更換新藥，這樣無形之中提高了治療成本，且副作用加大。因此不斷尋找新的抗癲癇藥物非常有必要，尤其是從中藥中開辟新的途徑。中藥防治癲癇具有緩效，作用時間長，副作用少，毒副反應(yīng)輕等特點。近年來中藥抗癲癇治療逐漸成為熱點，某些藥物已在臨床取得明顯療效。
　　 癲癇屬于中醫(yī)“癇癥”范疇，又名“

3、羊角風”。因其發(fā)病與先天因素相關(guān)，故有“胎病”之稱。其病因病機，中醫(yī)認為與先天因素、六淫疫毒、痰濁內(nèi)生、七情失調(diào)、腦竅外傷等有關(guān)。因先天因素或外邪致風陽、痰濁、瘀血蒙蔽清竅，氣機逆亂，腦神失養(yǎng)導致癲癇發(fā)作。病位在腦，涉及肝、脾、腎三臟。中醫(yī)藥治療癲癇已有上千年歷史，且取得一定療效，現(xiàn)代醫(yī)家在繼承傳統(tǒng)方藥治法的基礎(chǔ)上不斷創(chuàng)新，進一步豐富了癲癇的證治內(nèi)容。主要論治要法大體可分為“從肝論治”“從痰論治”“從脾論治”“從瘀論治”“從腎論治”等。

4、
　　 本課題組認為肝臟功能的異常與癲癇的發(fā)作有著密不可分的關(guān)系。肝為風木之臟，其氣升發(fā)，喜條達而惡抑郁，主筋，開竅于目。肝主疏泄而藏血，肝氣順暢，則諸臟腑、經(jīng)絡(luò)調(diào)和，氣血運行正常;若肝氣郁滯，水津運化失調(diào)，聚而生痰，痰濁隨氣上逆，痹阻經(jīng)絡(luò)，蒙蔽清竅則導致病人神昏或抽搐發(fā)作。此外，肝藏血，血屬陰，倘若陰血不足，則不能遏制陽旺，從而導致陽化風動;肝血不足，不可養(yǎng)筋，則也會出現(xiàn)肢體抽搐。若肝旺以致升發(fā)太過，會生風動火，煎熬津液，既則

5、結(jié)而為痰，風動痰升，阻塞清竅，而出現(xiàn)昏仆抽搐。歷代醫(yī)家在古籍中都有以上觀點的陳述?！饵S帝內(nèi)經(jīng)素問·卷二十一》曰:“木發(fā)之郁，太虛?；?，大風乃至，屋發(fā)折木……甚則耳鳴眩轉(zhuǎn)，目不識人，善暴僵仆?！边@是一段描寫癲癇從肝論治的理論基礎(chǔ)?！度驑O一病癥方論》說:“夫癲癇病，皆由驚動，使臟氣不平，郁而生涎，閉塞諸經(jīng)，撅而乃成?！币舱f明了癲癇的病因在于肝的疏泄失職?！秲?nèi)經(jīng)·大奇論》曰:“肝脈小急，癇瘛痙攣?！薄度彘T事親·癇》曰:“大凡風癇病發(fā)，項強直

6、視，不省人事，此乃肝經(jīng)有熱也?！薄端貑枴ぶ琳嬉笳摗吩?“諸風掉眩，皆屬于肝?！惫手胃问侵委煱d癇疾病的關(guān)鍵所在。本課題組自擬中藥復方柴胡桂枝湯，以疏肝理氣，鎮(zhèn)肝潛陽之功效在臨床治療癲癇疾病取得顯著療效。
　　 川芎作為為傳統(tǒng)中藥，已廣泛應(yīng)用到神經(jīng)系統(tǒng)及心腦血管系統(tǒng)疾病的治療中，其提取物川芎嗪具有改善循環(huán)，擴張血管，抗血小板聚集等多項作用，故在同類藥物的篩選中更具有優(yōu)勢。因不同的癲癇模型作用部位及作用機制不同，可用于探討抗癲癇藥物

7、的作用機制也不同。既往有關(guān)川芎嗪抗癲癇的研究僅僅建立某一種癲癇模型去證實川芎嗪的抗癲癇作用，不夠全面系統(tǒng)。本課題組參考國內(nèi)外成熟的癲癇模型研究，結(jié)合自身實驗特點，并通過預(yù)實驗摸索建模所需藥物劑量，學習模型動物的飼養(yǎng)及護理方法，最后成功建立四種不同的癲癇模型，并從行為學方面系統(tǒng)評價了川芎嗪抗癲癇的作用。對既往的相關(guān)研究進行了證實與補充。
　　 方法與內(nèi)容:
　　 1.最大電驚厥癲癇模型的建立
　　 1.1材料:實驗

8、動物選取昆明種小鼠，體重18～22g，雄性，由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供。儀器采用YSD-4G藥理生理實驗多用儀，由安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)。
　　 1.2方法:實驗前24h作最大電驚厥的篩選，即用兩鱷魚夾分別夾住小鼠雙耳尖部，預(yù)實驗確定定95％以上動物強直性驚厥發(fā)作的參數(shù)為(100V;20Hz)以后肢強直性伸直為指標，陽性者入選。
　　 選取符合驚厥標準的昆明小鼠60只，每組15只，分成4組。分別腹腔注射NS

9、、TMP200、400、800mg/kg，于給藥后1h、2h、3h、4h、5h分別測定最大電驚厥的小鼠只數(shù)。以探究川芎嗪抗癲癇作用的時量效關(guān)系。結(jié)果見圖3-1。
　　 再次選取符合驚厥標準的昆明小鼠50只，每組10只，分成5組。隨機分為模型組、川芎嗪高、中、低劑量組和安定組。按TMP200、400、800mg/kg劑量灌胃給藥，模型組給予等體積的生理鹽水，安定組用生理鹽水配成0.4mg/ml的溶液。給藥60min后，電刺激1次，

10、計算各組小鼠發(fā)生驚厥只數(shù)及驚厥發(fā)生率。結(jié)果見表3-1。
　　 2.戊四氮小鼠急性癲癇模型的建立
　　 2.1材料:實驗動物選取昆明種小鼠，體重18～，22g，雄性，由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供。戊四氮注射液購自Sigama公司，安定（地西泮注射液）由天津金耀氨基酸有限公司提供。
　　 2.2方法:預(yù)實驗確定95％以上動物出現(xiàn)陣攣性抽搐的戊四氮劑量，用生理鹽水配成8.5mg/ml溶液。選取小鼠50只，每組10只，

11、隨機分為模型組、川芎嗪高劑量組、中劑量組、低劑量組和安定組。按TMP200、400、800mg/kg劑量灌胃給藥，模型組給予等體積的生理鹽水，安定組用生理鹽水配成0.4mg/ml的溶液。給藥60min后，腹腔注射相應(yīng)劑量的戊四氮注射液。觀察指標采用Racine標準，0級:無反應(yīng);Ⅰ級:節(jié)律性口角、耳或面部肌肉抽動陣攣;Ⅱ級:點頭并伴隨更嚴重的面部肌肉抽動陣攣;Ⅲ級:出現(xiàn)前肢陣攣但不伴隨直立;Ⅳ級:前肢陣攣伴隨直立;Ⅴ級:全身強直陣攣發(fā)作

12、而跌倒。給藥后持續(xù)觀察30min，記錄小鼠陣發(fā)性痙攣發(fā)作的潛伏期（1-3級的發(fā)作時間），強直性驚厥（5級發(fā)作）的小鼠只數(shù)，大于30min小鼠死亡的只數(shù)，同時計算驚厥發(fā)作率和死亡保護率。結(jié)果見表3-2和圖3-2。
　　 3.士的寧小鼠急性癲癇模型的建立
　　 3.1材料:實驗動物選取昆明種小鼠，體重18～22g，雄性，由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供。士的寧注射液購自Sigama公司，安定（地西泮注射液）由天津金耀氨基酸有限

13、公司提供。
　　 3.2方法:預(yù)實驗確定95％以上動物出現(xiàn)陣攣性抽搐的士的寧劑量，用生理鹽水配成0.2mg/ml溶液。選取小鼠50只，每組10只，隨機分為模型組、川芎嗪高劑量組、中劑量組、低劑量組和安定組。按TMP200、400、800mg/kg劑量灌胃給藥，模型組給予等體積的生理鹽水，安定組用生理鹽水配成0.4mg/ml的溶液。給藥60min后，腹腔注射相應(yīng)劑量的士的寧注射液，持續(xù)觀察30min，觀察指標同前。記錄小鼠陣發(fā)性痙

14、攣發(fā)作的潛伏期，強直性驚厥的小鼠只數(shù)，大于30min小鼠死亡的只數(shù)，同時計算驚厥發(fā)作率和死亡保護率。結(jié)果見表3-3和圖3-3。
　　 4.匹羅卡品小鼠急性癲癇模型的建立
　　 4.1材料:實驗動物選取昆明種小鼠，體重18～22g，雄性，由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供。匹羅卡品注射液購自Sigama公司，安定（地西泮注射液）由天津金耀氨基酸有限公司提供。
　　 4.2方法:預(yù)實驗確定95％以上動物出現(xiàn)陣攣性抽搐的匹

15、羅卡品劑量，用生理鹽水配成40mg/ml溶液。選取小鼠50只，每組10只，隨機分為模型組、川芎嗪高劑量組、中劑量組、低劑量組和安定組。按TMP200、400、800mg/kg劑量灌胃給藥，模型組給予等體積的生理鹽水，安定組用生理鹽水配成0.4mg/ml的溶液。給藥60min后，腹腔注射相應(yīng)劑量的匹羅卡品注射液，持續(xù)觀察30min，觀察指標同前。記錄小鼠陣發(fā)性痙攣發(fā)作的潛伏期，強直性驚厥的小鼠只數(shù)，大于30min小鼠死亡的只數(shù)，同時計算驚

16、厥發(fā)作率和死亡保護率。結(jié)果見表3-4和圖3-4。
　　 5.統(tǒng)計學方法:采用spss(1)3.0統(tǒng)計軟件對上述觀察結(jié)果進行分析處理。計量資料用均數(shù)±標準差表示，多樣本的均數(shù)的比較急兩樣本均數(shù)的比較用方差分析，計數(shù)資料及率的比較用卡方檢驗，P＜0.05均表示有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.TMP對最大電驚厥急性小鼠癲癇模型的結(jié)果
　　 1.1TMP抗驚厥作用的時量效關(guān)系:于腹腔注射川芎嗪后，0.25

17、h時，低劑量川芎嗪組有1只小鼠未出現(xiàn)驚厥發(fā)作，MES的驚厥抑制率為7％;中劑量川芎嗪組有3只小鼠未出現(xiàn)驚厥發(fā)作，MES的驚厥抑制率為20％;高劑量川芎嗪組有8只小鼠未出現(xiàn)驚厥發(fā)作，MES的驚厥抑制率為53％。1h時，低劑量川芎嗪組有2只小鼠未出現(xiàn)驚厥發(fā)作，MES的驚厥抑制率為13％;中劑量川芎嗪組有8只小鼠未出現(xiàn)驚厥發(fā)作，MES的驚厥抑制率為53％，高劑量川芎嗪組有11只小鼠未出現(xiàn)驚厥發(fā)作，MES的驚厥抑制率為73％。結(jié)果表明川芎嗪抗驚

18、厥作用于0.25h即開始起效，0.5～1h時達到峰值，4h時作用基本消失。具體見圖3-1。
　　 1.2 TMP對最大電驚厥急性小鼠癲癇模型的結(jié)果:在最大電驚厥實驗中，模型組10只小鼠中有9只出現(xiàn)驚厥發(fā)作，驚厥率為90％，川芎嗪中劑量組10只小鼠中有8只出現(xiàn)驚厥發(fā)作，驚厥率為30％，川芎嗪高劑量組10只小鼠中僅有2只出現(xiàn)驚厥發(fā)作，驚厥率為20％。由此可見，中、高劑量川芎嗪組的驚厥率明顯低于模型組的驚厥率。說明川芎嗪可明顯降低最大

19、電驚厥小鼠驚厥率。
　　 2.TMP對戊四氮小鼠急性癲癇模型的結(jié)果
　　 2.1TMP對戊四氮小鼠癇性發(fā)作潛伏期的影響:與模型組相比較，中、高劑量川芎嗪組均能夠明顯延長小鼠陣發(fā)性痙攣發(fā)作的潛伏期，且三組之間的比較差異有統(tǒng)計學意義,說明中、高劑量川芎嗪可以延長戊四氮誘發(fā)的小鼠癇性發(fā)作的潛伏期。具體見表3-2。
　　 2.2 TMP對戊四氮致癇小鼠強直性驚厥發(fā)生率的影響:模型組小鼠在戊四氮誘導下強直性驚厥的發(fā)生率為1

20、00％，中、高劑量川芎嗪組的強直性驚厥率分別為50％和20％，均低于模型組的強直性驚厥率，且三組之間比較差異有統(tǒng)計學意義,說明中、高劑量川芎嗪均可以降低戊四氮所致的實驗性癲癇小鼠強直性驚厥發(fā)生率，且存在一定量效關(guān)系。具體見圖3-2。
　　 2.3 TMP對戊四氮致癇小鼠死亡時間及死亡保護率的影響:模型組小鼠死亡時間大于30分鐘的小鼠只數(shù)為0，死亡保護率為0％，中劑量川芎嗪組小鼠死亡時間大于30分鐘的小鼠只數(shù)為5，死亡保護率為50

21、％，高劑量川芎嗪組小鼠死亡時間大于30分鐘的小鼠只數(shù)為6，死亡保護率為60％，中、高劑量川芎嗪組的死亡保護率均高于模型組，且三組之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)說明中、高劑量川芎嗪均可以延長戊四氮所致癲癇小鼠的死亡時間。具體見圖3-2。
　　 3.TMP對的寧小鼠急性癲癇模型的結(jié)果
　　 3.1 TMP對士的寧小鼠癇性發(fā)作潛伏期的影響:與模型組相比較，中、高劑量川芎嗪組均能夠明顯延長小鼠陣發(fā)性痙攣發(fā)作的潛伏期，且

22、三組之間的比較差異有統(tǒng)計學意義,說明中、高劑量川芎嗪可以延長士的寧誘發(fā)的小鼠癇性發(fā)作的潛伏期。具體見表3-3。
　　 3.2 TMP對戊四氮致癇小鼠強直性驚厥發(fā)生率的影響:模型組小鼠在士的寧誘導下強直性驚厥的發(fā)生率為100％，中、高劑量川芎嗪組的強直性驚厥率分別為50％和30％，均低于模型組的強直性驚厥率，且三組之間比較差異有統(tǒng)計學意義,說明中、高劑量川芎嗪均可以降低士的寧所致的實驗性癲癇小鼠強直性驚厥發(fā)生率，且存在一定量效關(guān)系

23、。具體見圖3-3。
　　 3.3 TMP對士的寧致癇小鼠死亡時間及死亡保護率的影響:模型組小鼠死亡時間大于30分鐘的小鼠只數(shù)為0，死亡保護率為0％，中劑量川芎嗪組小鼠死亡時間大于30分鐘的小鼠只數(shù)為5，死亡保護率為50％，高劑量川芎嗪組小鼠死亡時間大于30分鐘的小鼠只數(shù)為7，死亡保護率為70％，中、高劑量川芎嗪組的死亡保護率均高于模型組，且三組之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)說明中、高劑量川芎嗪均可以延長士的寧所致癲癇小

24、鼠的死亡時間。具體見圖3-3。
　　 4.TMP對匹羅卡品小鼠急性癲癇模型的結(jié)果:與模型組相比較，高劑量川芎嗪組能夠明顯延長小鼠陣發(fā)性痙攣發(fā)作的潛伏期，與模型組相比較差異有統(tǒng)計學意義中劑量川芎嗪組小鼠死亡只數(shù)大于30分鐘的小鼠只數(shù)為2，死亡保護率為20％，高劑量組小鼠死亡時間大于30分鐘的小鼠只數(shù)為2，死亡保護率為20％，與模型組之間無統(tǒng)計學意義。說明高劑量川芎嗪僅可以延長匹羅卡品誘發(fā)的小鼠癇性發(fā)作的潛伏期。
　　 結(jié)論