1、藏羚羊（Pantholops hodgsonii）隸屬青藏高原土生種偶蹄目、?？啤⒉亓鐚?，棲息在海拔4300～5500m，具有極強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)能力和低氧耐受能力，是研究高原低氧適應(yīng)機(jī)制的最好動(dòng)物模型，該物種是經(jīng)過(guò)無(wú)數(shù)代的自然選擇而保留下來(lái)的青藏高原特有的土生動(dòng)物并形成了獨(dú)特的低氧適應(yīng)機(jī)制。內(nèi)皮素（Endothelin,ET）是一種血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的生物活性多肽，具有強(qiáng)烈收縮血管作用，最初是由豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)上清液分離出的一種血管活性肽,其

2、有3種異構(gòu)肽：ET－1、ET－2及ET－3，ET-1mRNA主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，ET-2主要在腎臟表達(dá)較多，ET-3則主要在神經(jīng)細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)，有一定的組織特異性，其中以ET－１的生理功能和病理學(xué)意義最大；在正常時(shí)肺組織中的肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮、和肺臟神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞均有ET-1mRNA,可以表達(dá)和合成ET-1；在引起組織缺血、缺氧和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的許多心血管疾病中，內(nèi)皮素均參與發(fā)病過(guò)程，尤其在缺氧性肺動(dòng)脈高壓形成機(jī)制

3、中發(fā)揮了重要作用,低氧時(shí)作用在血管平滑肌細(xì)胞上，增強(qiáng)ET-1所引起的肺動(dòng)脈收縮。我們前期預(yù)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：藏羚羊雖然常年生活在海拔4500m以上的高寒、缺氧地區(qū)，其肺動(dòng)脈壓卻低于同海拔的藏綿羊，為了進(jìn)一步從基因水平揭示ET-1在藏羚羊在低氧適應(yīng)中的作用機(jī)制，我們從藏羚羊肺臟組織中克隆了ET-1基因并測(cè)序及序列分析。
　　本課題將對(duì)從可可西里自然保護(hù)區(qū)（4300m）捕捉到的10只藏羚羊、10只藏綿羊和從民和縣(1800m)購(gòu)買(mǎi)的8

4、只低海拔綿羊的體重、心率、血紅蛋白、肺動(dòng)脈壓力等生理指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，應(yīng)用ELISA法測(cè)定藏羚羊、藏綿羊和低海拔綿羊血清ET-1含量。從藏羚羊肺臟組織中提取總RNA,通過(guò)RT-PCR法分段擴(kuò)增，并將得到的cDNA序列進(jìn)行拼接后獲得藏羚羊ET-1cDNA編碼區(qū)，編碼區(qū)序列長(zhǎng)度為609個(gè)bp，編碼202個(gè)氨基酸。將該基因的編碼區(qū)序列登陸GenBank，獲得注冊(cè)號(hào)為JQ031153。利用DNAMAN6.0軟件分析顯示：其序列與綿羊、

5、牛、豬、大鼠以及斑馬魚(yú)的的同源性分別是：98％、95%、86%、81%、48%；推測(cè)出氨基酸序列與綿羊、牛、豬、大鼠以及斑馬魚(yú)的的同源性分別是：97%、94%、79%、76%、34%；與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)登錄的綿羊ET-1氨基酸比對(duì)發(fā)現(xiàn)藏羚羊ET-1基因?qū)?yīng)的氨基酸發(fā)生突變：30位和172位的蘇氨酸變?yōu)楸彼帷?0位和163位的纈氨酸變?yōu)楸彼帷?41位天冬氨酸變?yōu)樘於０贰?81位的苯丙氨酸變?yōu)槔i氨酸，這種突變是否與藏羚羊肺血管低氧適應(yīng)有

6、關(guān)待進(jìn)一步研究。為此本研究克隆了藏羚羊肺組織ET-1基因的CDS區(qū)，并發(fā)現(xiàn)藏羚羊ET-1基因編碼的氨基酸發(fā)生突變，在基因水平上為研究藏羚羊低氧適應(yīng)打下基礎(chǔ)。
　　前期研究發(fā)現(xiàn)在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中，藏羚羊在呼吸、循環(huán)，等多方面形成了獨(dú)特的適應(yīng)高原低溫、低氧環(huán)境的生理機(jī)制。本研究生理學(xué)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果顯示：藏羚羊與藏綿羊、低海拔綿羊的體重兩兩比較無(wú)明顯差異（P>0.05）；藏羚羊Hb含量、HR及mPAP值均較藏綿羊低，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、（P＜0.01）；與低海拔綿羊比較發(fā)現(xiàn)，藏羚羊HR顯著低于低海拔綿羊,而Hb和mMPAP值接近，且無(wú)明顯差異（P>0.05）。此外，低海拔綿羊的Hb和mPAP均低于藏綿羊（P＜0.05），而藏綿羊HR低于低海拔綿羊，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)明顯差異（P>0.05）。ELISA法測(cè)定血清中的ET-1含量結(jié)果顯示：藏羚羊組ET-1含量低于藏綿羊組，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與低海拔綿羊組相比無(wú)明顯差異，藏綿羊組與低海拔綿羊組相比無(wú)明顯差異。